ELISA通关必备丨结果篇丨白板与花板

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一、白板

如果显色完成后,肉眼可见整板没有显示反应,可能原因及应对方法是什么呢?小科整理了可能的原因,希望对您有帮助。

序号 可能原因 解决方案
1 试剂盒储存不当;不同试剂盒试剂混用 购买新的试剂盒,注意储存条件;不可混用
2 孵育温度低,时间短 如果温度偏低,则延长孵育时间和显色时间
3 错加、漏加试剂 严格按照说明书步骤添加正确试剂
4 用于配置溶液的容器不干净,或水有问题 使用干净容器以及合格的蒸馏水
5 检测抗体和/或HRP浓度太低 参照说明书,不可随意稀释
6 试剂温度不均一 所有试剂要室温平衡 30 min
7 洗板过程中浸泡时间长,洗板次数太多,洗板冲击力大 严格按说明书操作

 

二、花板

花板是指空白、阴性、阳性对照以及室内质控孔结果正常,而标本孔的吸光度(OD 值)却明显偏高,可能原因及应对方法详见下表。

序号 可能原因 解决方案
1 洗涤次数少,不充分 按说明书要求洗涤
2 底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB )被金属离子或氧化剂污染或曝光 配置时使用干净容器以及合格蒸馏水;避光保存
3 孵育温度高和/或时间过长 控制孵育和最后酶促反应的温度和时间
4 加样时未更换枪头,造成交叉污染 每个样都更换枪头
5 附近孔交叉污染 洗涤时,洗液不可溢出孔洞,垂直拍板;使用合适的拍板纸,避免孔内进入纸屑尘渣;孵育时封板要严密,防止阳性标本的液体蒸发
6 样本存在内源性干扰物质 推测可能的感染物质,并进行对应处理
7 样本溶血、贮存过久、凝集不全、被细菌污染、采血管中添加物影响等 避免溶血、污染、过久储存等现象