ELISA通关必备丨数据篇丨标准曲线不佳
ELISA实验加入显色底物后，标准品有颜色，但结果分析发现标准品最高点吸光值偏低或偏高、标准曲线无梯度等等，总结如下原因： 一、标准曲线最高点吸光值偏高，超出仪器检测范围 ELISA标准曲线最高点的吸光值一般在3.0以下，若太高超出仪器检测范围，显示OVER FLOW，可能原因： 序号 可能原因 解决方法 1 如OD绝对值靠谱，则显色过度 TMB显色体系中建议根据S1，S2颜色进行判断， 当S1，…
2023-01-17
ELISA通关必备丨数据篇丨数据分析与标曲拟合
做完ELISA实验，测完吸光度，数据怎么处理？标准曲线不是直线怎么办？小科整理了ELISA数据处理相关知识，希望对您有帮助。 一、ELISA 标准曲线分析步骤 标曲和样本孔的每个孔 450nm 的OD值减去630nm（或570nm）的OD值； 再将获得的标曲和样本孔数据分别减去空白孔Blank的OD值； 以标曲的浓度为横坐标，以上算出的OD值为纵坐标，拟合标曲（选择R2值大于0.99的比较好的拟合…
2023-01-09
ELISA通关必备丨结果篇丨白板与花板
一、白板 如果显色完成后，肉眼可见整板没有显示反应，可能原因及应对方法是什么呢？小科整理了可能的原因，希望对您有帮助。 序号可能原因解决方案 1试剂盒储存不当；不同试剂盒试剂混用购买新的试剂盒，注意储存条件；不可混用 2孵育温度低，时间短如果温度偏低，则延长孵育时间和显色时间 3错加、漏加试剂严格按照说明书步骤添加正确试剂 4用于配置溶液的容器不干净，或水有问题使用干净容器以及合格的蒸馏水 5检测…
2022-12-19
ELISA通关必备丨操作篇丨常见问题及解决方案
一、为什么所有试剂和检测样本要平衡至室温后再进行加样操作？ 温度是ELISA结合反应的重要影响因素。为了使所有样本在一致的温度下反应，实验前务必将所有试剂平衡至室温，包括检测样本。避免因温度的动力学反应差异而导致ELISA检测结果的不准确。 二、如何获得良好线性的标准曲线？ 按照推荐方式保存标准品；溶解标准品之前需短暂离心，彻底收集粉末；确保标准品完全溶解和混匀（大约10min），然后再进行后续的…
2022-12-06
ELISA通关必备丨操作篇丨加样与洗板
ELISA 加样操作要点 精准的仪器和准确的操作是保证ELISA结果准确关键，怎样的加样方式才是正确呢？ELISA实验中一般有5次加样，即加标本、加检测抗体、加酶结合物和加显色底物及终止液。小科将ELISA加样操作要点进行归纳，供参考。 实验室使用的微量加样器应注意保养并定期校正。ELISA比较敏感，每孔加入液体量误差会导致最后读数差别，因此避免仪器带来误差。 加样前，溶液充分混匀，垂直悬空加入液…
2022-11-02
ELISA通关必备丨操作篇丨溶解与稀释标准品
ELISA标准曲线是结果计算的尺子，标准品是ELISA 实验成功与否的关键点。怎样正确溶解、稀释标准品呢？ 粉末标准品短暂离心，让因运输沾到管盖、管壁的标准品沉到管底。 根据瓶标签加入一定体积的蒸馏水，加水后轻柔涡旋震荡，室温静置溶解 10-30min，让粉末完全溶解。注意：加水后暂不用移液枪吹吸，避免蛋白未溶解，枪头带出部分蛋白，待完全溶解后可吹吸或涡旋振荡混匀。 标准品梯度稀释： 标准品稀释液…
2022-10-10
ELISA通关必备丨样本篇丨不常见样本
介绍使用ELISA技术检测时处理几种不常见样本的方法，包括唾液、痰液、尿液、肺泡灌洗液、脑脊液以及胸水。对于每种样本，文章详细介绍采集前的准备、采集过程、离心条件及储存要求等关键步骤，为大家提供实用指导以保证实验结果的准确性。正确的样本处理方法对提高ELISA检测效果至关重要。
2022-09-14
ELISA通关必备丨样本篇丨常见样本丨组织
利用ELISA（酶联免疫吸附测定）进行检测的样本类型包括常见的血液（血清、血浆），组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清以及不常见的皮肤组织、尿液、粪便、肺泡灌洗液、唾液、脑脊液、胸腹水等，这些样本收集的时间、处理方法和保存都会影响到ELISA实验的结果。下面对常见组织样本处理方法整理，希望对您有所帮助。 ■ 组织样本一般是制成组织匀浆，处理方法如下： 取适量组织块，于预冷PBS（02mol/L, …
2022-08-29
