ELISA通关必备丨如何选择试剂盒

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小伙伴们为ELISA实验选购试剂盒时,是不是有很多问号?选什么物种?什么指标?什么检测限?怎样的精密度,稀释线性,特异性是优秀的? 小科整理了ELISA产品相关要素,助您五分钟掌握如何选到适合自己实验的试剂盒

ELISA产品选择要素

  1. 根据实验物种及待检样品性质来选择
    • 种属:人、小鼠、大鼠、鸡、牛、猴等;
    • 样本类型:血清、血浆、组织培养上清、组织或细胞裂解物。
  2. 根据样品中检测物水平选择
    • 宽动力学检测范围:对样品种待测物水平没有任何参考数据;
    • 高灵敏度试剂盒:待检物含量很低。
  3. 根据样本可获得性来选择
    通常商品化试剂盒的样品用量在50μL或100μL,也有部分用量可以少至20μL。
  4. 供应商资质评估
    • 同行口碑
    • 文献引用
    • 品牌历史
  5. 试剂盒关键技术参数
    • 加标回收率
    • 精密度
    • 灵敏度等

传说中的八大质控指标

规范严格的ELISA厂商会对产品进行质控,联科生物每个指标的ELISA产品说明书都会标注八大质控数据。一起来了解下这些指标的含义~

回收率

将已知的低、中、高浓度的重组蛋白掺入到待测样本中,掺入前后测到的浓度增加部分与掺入浓度之比就是回收率,以此验证检测的准确度。复杂的样本基质,如血清、血浆中可能含有干扰因子,影响准确定量目标分析物。优秀的ELISA试剂盒回收率通常在80-120%之间(视为无可计量的基质干扰),合格试剂盒在60%左右。

稀释线性

样本稀释后,最终分析物浓度应该相同,这个就是公认的实验线性。干扰因子会影响实验的线性,除非在研发环节克服这些干扰效应。我们为每个验证过的样本类型用试剂自带的稀释液进行系列稀释。结果用检测值和理论值的百分比表示,线性介于80-120%为理想结果。

精密度

在相同条件下,对被测量物(高、中、低浓度)进行多次反复测量,测得值之间的一致(符合)程度。这一特性具有重要意义:

  1. 保证一项试验中得到的结果是准确的,并且一次实验到下一次实验结果可重复;
  2. 判定两个结果相同还是不同。

通常用变异系数(coefficient of variation, CV)来表示。优秀ELISA试剂盒的酶标板内变异系数(CV)小于5%,酶标板间变异系数小于8%。

校准

每个试剂盒包含的标准品都经过高纯度蛋白的校准。联科生物标准品质量是通过与母校准品进行比较而制定。用于保证不同批次间试剂盒的一致性,所有批次的试剂盒均经过母校准品校对,不会出现结果偏差。

特异性

抗体是特异的,只与相应抗原反应。实际制备的抗体却常有非特异性反应,这是因为抗原不纯造成的。多组分抗原之间存在共同的抗原决定簇,或者两个抗原决定簇结构类似能与同一抗体结合,均可出现抗体与异源抗原的交叉反应。

ELISA试剂盒包含的试剂

以双抗夹心法中的二步法ELISA试剂盒为例,ELISA试剂盒一般包含说明书,封板膜,预包被的酶标板,标准品,生物素被标记的检测抗体,链霉亲和素标记的HRP,显色液,终止液,检测缓冲液,标准品稀释液,洗液等十个组分。