ELISA常见样本的处理方法—组织样本

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ELISA(酶联免疫吸附剂测定)是一种快速、灵敏、准确可靠的一种定量分析方法,样本的处理对于ELISA实验的成功有着举足轻重的作用。利用ELISA进行检测的样本类型包括常见的血液(血清、血浆),组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清以及不常见的皮肤组织、尿液、粪便、肺泡灌洗液、唾液、脑脊液、胸腹水、前列腺液、精液、阴道分泌物等,这些样本收集的时间、处理方法和保存都会影响到ELISA实验的结果。下面就常见ELISA组织样本处理方法的整理,希望对您有所帮助。

组织样本一般是制成组织匀浆,处理方法如下:

  1. 取适量组织块,于预冷PBS(0.02mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,称重后备用(组织块较大需先剪碎后再匀浆);
  2. 可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果:首先将组织块移入玻璃匀浆器,加入 5-10ml预冷PBS(组织与 PBS 的质量体积比建议为 1:5,即1g 样本加入 5ml PBS)进行充分研磨(有条件实验室可选用机器匀浆),该过程需在冰上进行;得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融进一步处理(超声破碎过程中注意冰浴降温;反复冻融法可重复 2 次)。
  3. 将制备好的匀浆液于5000×g 离心5分钟,留取上清即可检测。
  4. 如果样本需要长期保存,请添加蛋白酶抑制剂。根据实验需要,组织匀浆样本可先定量总蛋白,以便于统计分析数据。某些组织样本如肝脏,肾脏,脑组织会有假阳性反应。

处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程,由于蛋白容易变性,降解,故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要,尤其注意不要反复冻融,样本处理之后可分装密封保存,4℃保存应小于 1 周,-20℃不应超过 1 个月,-80℃不应超过2个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。样本的处理是实验成功的第一步,以上就是关于常见样本处理方法的一个简述,供研究者参考。

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PMSF,英文全称为Phenylmethanesulfonyl fluoride,也称为Phenylmethylsulfonyl fluoride或α-Toluenesulfonyl fluoride,中文名称为苯甲基磺酰氟。PMSF是常用的蛋白酶抑制剂,可抑制丝氨酸蛋白酶(如胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶)。工作浓度通常为0.1~1mM(即17~174μg/ml)。PMSF在水液体溶液中不稳定,30分钟就会降解一半,必须在每一次分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF,样品处理超过1h,补加一次(见水分解,使用前加入)。

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