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作者:联科生物 发布日期:2021-08-16 09:00
细 胞 凋 亡 概 念 及 其 特 征细胞凋亡(Apoptosis):也称细胞程序性死亡(Programmed Cell Death,PCD),是为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡,在多细胞生物去除不需要的或异常的细胞中起着必要的作用,属于细胞的“自杀”行为。 ![]() 细胞凋亡的典型特征: 1)线粒体膜电位的丧失; 2)细胞膜PS(磷脂酰丝氨酸)的外翻; 3)细胞核凝缩和断裂。
细胞凋亡热点问题: ? 胞内凋亡特异性蛋白酶(如Caspase)的活化 ? 线粒体对凋亡的调控 ? Bcl-2蛋白家族对凋亡的调控
凋亡检测 —— Annexin V 细胞密度通常不超过1×106/ml,以免引起凋亡 2,收集 上清消化全收 因部分凋亡细胞可能悬浮于培养基中,须先收集上清,离心收集沉淀,再消化收集贴壁细胞,合并上清和消化下来的细胞。 3,消化 Accutase 避免因消化过度使PS外翻,造成假阳性。 用eBioscience的Accutase酶替代胰酶,在多种细胞系中得到验证,对细胞更温和、长时间消化也没有影响。(对凋亡不明显的实验强烈推荐)使用细胞消化液--实际效果比较 4,阳性质控 联科 Multisciences 没有明显的凋亡,该如何调节补偿以及设门? 联科凋亡试剂盒配备阳性质控液,使补偿调节so easy 5, 方案 4管 单双混合 染色:1, Blank、2, Annexin V、3, PI、4, Annexin V+PI 上机:1, Blank、2, 50%Blank +50%Annexin V、3, 50%Blank +50% PI、4, 50%Blank+50%Annexin V+PI、 5, 50%Blank+25%Annexin V+PI+25%Annexin V 6,电压 足够大 大到快要超出边界。 7,细胞数量 足够多 多到细胞全部收集。 8,补偿 横平竖直 3、4象限横平;2、4象限竖直 9,漂亮图片 黄金分割(三分原则)。
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