流式细胞术 — 细胞凋亡数据分析技巧讲义

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作者：联科生物 发布日期：2021-08-16 09:00

细 胞 凋 亡 概 念 及 其 特 征细胞凋亡（Apoptosis）：也称细胞程序性死亡（Programmed Cell Death，PCD），是为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡，在多细胞生物去除不需要的或异常的细胞中起着必要的作用，属于细胞的“自杀”行为。
细胞凋亡的典型特征：

1）线粒体膜电位的丧失；

2）细胞膜PS（磷脂酰丝氨酸）的外翻；

3）细胞核凝缩和断裂。
凋亡 (apoptosis)
程序性死亡，机体为更好地适应生存环境而采取的一种主动死亡过程。

凋 亡 研 究 热 度 分 析细胞凋亡与疾病：

凋亡不足 凋亡过度
肿瘤 心血管疾病
自身免疫病 血液系统疾病
病毒感染 重症肝炎
退行性神经疾病
如老年痴呆症
帕金森症

细胞凋亡热点问题：
? 细胞接受胞外信号的刺激启动凋亡

? 胞内凋亡特异性蛋白酶（如Caspase）的活化

? 线粒体对凋亡的调控

? Bcl-2蛋白家族对凋亡的调控
凋 亡 分 期

早期事件：
Ø磷脂酰丝氨酸(PS)外翻Ø线粒体受损Ø细胞色素C释放		 中期事件：
ØCaspase 3/7/8/9活化		 晚期事件：
ØDNA片段化

凋亡检测 —— Annexin V 关键技术 9 项
1，接种 对数生长

细胞密度通常不超过1×106/ml，以免引起凋亡

2，收集 上清消化全收

因部分凋亡细胞可能悬浮于培养基中，须先收集上清，离心收集沉淀，再消化收集贴壁细胞，合并上清和消化下来的细胞。

3，消化 Accutase

避免因消化过度使PS外翻，造成假阳性。

用eBioscience的Accutase酶替代胰酶，在多种细胞系中得到验证，对细胞更温和、长时间消化也没有影响。（对凋亡不明显的实验强烈推荐）使用细胞消化液－－实际效果比较

4，阳性质控 联科 Multisciences

没有明显的凋亡，该如何调节补偿以及设门？

联科凋亡试剂盒配备阳性质控液，使补偿调节so easy

5, 方案 4管 单双混合

染色：1, Blank、2, Annexin V、3, PI、4, Annexin V+PI

上机：1, Blank、2, 50%Blank +50%Annexin V、3, 50%Blank +50% PI、4, 50%Blank+50%Annexin V+PI、 5, 50%Blank+25%Annexin V+PI+25%Annexin V

6，电压 足够大

大到快要超出边界。

7，细胞数量 足够多

多到细胞全部收集。

8，补偿 横平竖直

3、4象限横平；2、4象限竖直

9，漂亮图片

黄金分割（三分原则）。

关键技术 9 项1，接种：对数生长

2，收集 ：上清消化全收

3，消化：Accutase

4，阳性质控：联科 Multisciences

5，方案：单双混合

6，电压：足够大

7，细胞数量：足够多

8，补偿 ：横平竖直

9，漂亮图片 ：黄金分割