如何用淋巴细胞分离液分离单个核细胞?

1)分离外周血中的单个核细胞(PBMC) 1.抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中,加等量含5~10IU/ml肝素的无血清缓冲液悬浮细胞。将细胞悬液小心加在与血液等量的淋巴细胞分离液上,室温中,水平离心500×g 20分钟。此时离心管中形成5层:最上面是血浆,血浆层和淋巴细胞分离液之间是PBMC,淋巴细胞分离液层和最下面的红细胞层之间是粒细胞层,又成为棕黃层。 2.吸去最上层的血浆,收集血…

流式细胞术:细胞凋亡实验详解

— 摘要 — 细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞凋亡形式,根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别,可以将二者区别开来。 细胞凋亡的检测方法有很多,下面介绍几种常用的测定方法。 细胞凋亡的形态学检测 根据凋亡细胞固有的形态特征,人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。 1. 光学显微镜和倒置显微镜 (1) 未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但…

ELISA试剂盒实验前都要做哪些准备?

成功总是青睐有准备的人,ELISA试剂盒检测是否能完美的完成,需要提前做好准备,具体应该做哪些准备呢? 1. 仔细阅读说明书,确定试剂盒在有效期内。 2. 按说明书确定所有试剂是否齐全,完整的Sunny ELISA试剂盒包含预包被酶标板,检测抗体、链霉亲合素标记的HRP、标准品、标准品稀释液、TMB显色液、终止液、洗液等10个组分。另外要确认试剂盒以外的材料是否齐全,如酶标仪、移液器及枪头、加样槽…

多色流式中荧光补偿调节方法与步骤

尽管多色流式细胞术目前已被广泛应用,但是荧光补偿的准确调节却是很多人实验中遇到的一大难题。 我们先来看看为何要做荧光补偿这个动作? 每一种荧光分子都发射某一特定波长范围内的光,然而这些荧光的发射光谱会发生重叠,“荧光补偿”是指修正荧光渗漏的过程,从某个探测器除去除匹配荧光以外的其他任何荧光信号的过程即为荧光补偿。荧光补偿过程从原理上来说相对简单,但实际上涉及许多精细、敏感的…

血小板活化检测方法简介

哪些情况下需要进行血小板活化检测 直接测量循环血小板活化状态与反应性; 可测定凝血酶等诱导剂活化的血小板,即通过血小板体外活化,评估病人血小板的活化能力; 血小板活化与临床的关系: 监测血小板活化相关疾病过程,抗血小板药物疗效或治疗药物的影响,预测血栓形成; 心肌缺血(心绞痛、心肌梗塞)与血小板活化有关; 预测冠状动脉成形术后发生急性缺血事件的危险性; 缺血性脑血管病与血小板活化有关; 子痫前期、…