要想流式做得好，荧光知识少不了
上一期我们讲到流式实验的三大要素是样本（细胞或颗粒）、流式细胞仪和荧光素偶联抗体，进而讲到了荧光素的选择问题，本期让我们回过头来了解了解常见荧光素的特点。荧光素按激发光波长来分，主要是激发波长为375 nm、405 nm、488 nm和633 nm 4类，其中，常用的是激发波长为488 nm和633 nm的荧光素，如FITC、PE、APC、PI等。 激发波长为488 nm的荧光素 1. 异硫氰酸荧…
2020-06-02
ELISA实验操作干货继续，收藏！
师弟：师姐师兄把ELISA总结的干货全公开了！ 师妹：欧耶！结合上期的干货一起收藏吧。 Q：ELISA实验加完底物显色后，所有孔都无色，阳性对照也很弱，什么原因呢？ Q：ELISA实验加入显色底物后，标准品有颜色，但结果分析发现标准品最高点吸光值偏低或偏高、标准曲线无梯度等等，总结如下原因： 1、标准曲线最高点吸光值偏高，超出仪器检测范围ELISA标准曲线最高点的吸光值一般在3.0以下，若太高超出…
2020-04-10
细胞周期检测-知识点汇总
流式细胞术分析细胞周期的原理 在细胞周期的不同时期，DNA含量存在差异，用DNA染料进行染色（如应用最广泛的染料PI），DNA含量多，荧光强度高，DNA含量少，荧光强度低，因此可以根据DNA荧光强度的变化，来判断细胞处于哪个时期。 利用PI分析细胞周期，需要加入RNase消除RNA的影响 PI是通过插入双螺旋结构中叠加在一起的碱基对核酸进行染色的，并且它可以插入所有DNA和RNA的双链区，PI不是…
2020-01-19
Th细胞检测方案 - 技术要点汇总
Th检测一般操作步骤 人/小鼠/大鼠Th检测方案 人/大鼠Th1/Th2CD3/CD8/IFN-γ/IL-4小鼠Th1/Th2CD3/CD4/IFN-γ/IL-4 由上图可知，抗凝剂选择肝素钠或肝素锂，不影响Th细胞的活化和细胞因子的分泌。 非肝素抗凝血(如ETDA、枸橼酸钠抗凝血)，可通过淋巴细胞分离液处理后，再进行刺激/阻断，仍然可以检测到细胞因子，如下图：
2020-01-14
流式操作步骤：表面抗体染色
细胞样本 取100ul细胞悬液（细胞计数后用流式染色缓冲液 Flow Cytometry Staining Buffer调整浓度为1×107/mL） 加入适量的表面抗体，室温避光孵育15min（抗体用量和孵育条件详见抗体说明书） 加入1~2ml流式染色缓冲液，300g离心5min弃上清 用 500ul 流式染色缓冲液重悬细胞，上机检测并分析如不能立即检测，用0.5ml 0.1~4%多聚…
2019-10-25
Th17 检测原理和样品处理方法
组分25T抗人 CD3, FITC (克隆号：OKT3)150 μl抗人 CD8α, PerCP-Cy5.5 (克隆号：RPA-T8)150 μl抗人 IL-17A, PE (克隆号：(64DEC17)150 μl佛波酯/离子霉素混合物 (250×)100 μl布雷非德菌素 A/莫能霉素混合物 (250×)100 μl固定破膜剂试剂…
2019-10-13
