BioVision哺乳动物细胞&组织蛋白提取试剂盒

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作者:联科生物 发布日期:2015-12-09 00:00

BioVision的哺乳动物细胞&组织蛋白抽提试剂盒(Cat.# K269-500)提供了优化的抽提缓冲液、蛋白酶抑制剂和DTT,方便您从培养的细胞或组织样品中抽提出非变性的蛋白质。用该试剂盒获得的细胞裂解物可用于多种用途,比如酶活性分析(如Caspase活性检测)、Western blot等。整个过程不到二十分钟。
主要特点:
1、过程简单,20分钟以内即可完成;

2、操作方便快捷;

3、哺乳动物细胞提取试剂盒提供了最优化的细胞裂解缓冲液和蛋白酶抑制剂混合物,以及其它相关试剂,在非变性的条件下从哺乳动物组织和细胞中提取其蛋白。
试剂盒组分:

Component K269-500/500 assays Color Code Part Number
Extraction Buffer 50 ml NM K269-500-1
Protease Inhibitor Cocktail 1 vial Red K269-500-2
DTT (1 M) 110 µl Blue K269-500-3

试剂准备:
1、打开盒子后,Extraction Buffer储存于4℃,Protease Inhibitor Cocktail和DTT储存于-20℃;

2、Protease Inhibitor Cocktail是冻干粉,加100μl DMSO溶解,吹吸几次(该溶液为500X );

3、使用前,加2μl DTT和2μl Protease Inhibitor Cocktail至1ml Cell Extraction Buffer(该混合物为Extraction Buffer Mix)

4、实验过程中要保证Extraction Buffer Mix一直置于冰上。

实验操作步骤:
该步骤用于提取2*10e6 cells 且可以得到~100-300 μg细胞裂解物。若要得到更多的裂解物,请适当按比例增加体积。

1、4℃,600g离心5分钟收集细胞。

(注意:贴壁细胞需要刮下至PBS溶液,离心收集细胞。)

2、100μl Extraction Buffer Mix 重悬细胞,吹打几次。

(注意:组织样本,用相当于组织匀浆2-3倍体积的Extraction Buffer Mix,直到完全裂解。)

3、冰上孵育10分钟,随后涡旋5秒。

4、用微型离心机高速离心3分钟。

5、收集上清(细胞裂解物),弃沉淀。

6、-70℃冻存细胞裂解物,可用于进一步的研究。

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