【视频】PeproTech细胞因子溶解稀释方法

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一、查看说明书

1 确定合适的溶解液

收到产品后,首先应查看说明书中细胞因子储存和处理的方法。见下图:

2 确定合适的温度

图中的表格给出了细胞因子在冻干粉(lyophilized)状态下的溶解(reconstituted)和稀释(extended storage)的储存温度以及时间,您可以根据自己的实际需要选择。

备注:若说明书遗失,可在PeproTech官网搜索栏输入产品批号查找。

二、溶解

1 离心

细胞因子为冻干粉,开盖前10000-12000rpm离心30s。

2 溶解

根据说明书红色标识地方的描述,选择合适的溶解液,溶解到后边的浓度范围内。如此可以确保蛋白充分溶解复性,保证产品质量。请不要使用非建议溶液溶解。

目的:使细胞因子从无活性的冻干粉状态充分溶解复性成为有活性的蛋白溶液。

注意:不要用涡旋振荡仪剧烈涡旋,可以用枪头轻轻吹打几次助溶。有的细胞因子溶解比较慢,需要在室温静置或者摇床低速摇一段时间使充分溶解。

3 短期储存

溶解后的蛋白溶液可以在2-8度储存1周。

4 长期储存

如果您的实验,一周内不能用完。必须将第2步中获得的溶液用含载体蛋白的溶液进一步稀释。

目的:对溶解的蛋白溶液进行稀释冻存。加入载体蛋白可以封闭掉管壁上的蛋白结合位点,且可以在低温下维持细胞因子的稳定。

三、稀释

1. 配制

配制0.1%BSA或者10%FBS或者5%海藻糖的稀释液备用(确保无菌),这三种稀释液的配制的Buffer可以用PBS或者细胞基础培养基。使用以上三种稀释液的任意一种稀释重悬的蛋白溶液,稀释浓度根据您的使用浓度确定,不要低于10ug/ml。即可分装成小管,冻存在-20—-80度。

2.使用方法

使用时取用一支冻存的细胞因子,加入到您的培养基中至使用浓度。细胞因子应避免反复冻融。

四、FAQ

Q1:为什么会有这么多种溶解方法?

A:蛋白的溶解性与很多因素有关,其中比较重要的是pH值和离子强度。PeproTech的细胞因子或重组蛋白在出厂前均经严格测试,说明书上所标明的溶解液是能够将该细胞因子或重组蛋白完全溶解的液体。如果您所用的溶解液的pH值和离子强度与说明书中所标明的不符,很多时候会造成细胞因子或重组蛋白不能完全溶解或者根本无法溶解,这样所配得的细胞因子或重组蛋白必然活性不够或丧失。

Q2:高于或低于该浓度范围会有什么问题呢?

A:首先,细胞因子或蛋白会不稳定,即很容易出现活性下降的现象。其次,高于这个浓度范围,可能会超过该蛋白的最大溶解浓度,即蛋白无法完全溶解。再者,高于或低于该浓度范围,蛋白可能会出现聚集(aggregation),最终结果还是部分蛋白未溶解,导致蛋白活性的减弱。

Q3:若想保证溶解液与冻干粉充分混匀,以实现细胞因子或重组蛋白的完全溶解,该怎么办呢?

A:多数细胞因子或重组蛋白的冻干粉是非常容易溶解的,一般我们用移液枪的枪头轻吹几下,即可使细胞因子或重组蛋白完全溶解。对于不易溶解的细胞因子或蛋白,PeproTech会在说明书中进行备注(Note),

五、溶解稀释套装

联科生物细胞因子溶解稀释套装外观为无色澄清透明的液体,无明显异物,无菌,适用于细胞因子的溶解和稀释,使用方便,简单操作,可高效溶解并稳定保存相应的细胞因子。

类别 目录号 产品名称 规格
溶解稀释套装 PK002 重组细胞因子溶解稀释套装II 1 kit
溶解液 PS0011 无菌去离子水 (Water) 1ml
PS0021 磷酸盐缓冲液 ( Sodium Phosphate) 5mM pH 7.4 1ml
PS0031 柠檬酸盐缓冲液 ( Citric Acid) 10mM pH 3.0 1ml
PS0041 醋酸盐缓冲液 ( Acetic Acid) 100mM 1ml
PS0051 Tris缓冲液 ( TriS) 5mM pH7.6 1ml
PS0061 1×PBS缓冲液 ( Phosphate Buffer Solution PBS) pH7.2 1ml
PS0071 磷酸钠缓冲液(Sodium Phosphate) pH 7.2 Con:5mM 1ml
PS0081 磷酸钠缓冲液(Sodium Phosphate) pH 7.6 Con:5mM 1ml
PS0091 磷酸钠缓冲液(Sodium Phosphate) pH 8.0 Con:5mM 1ml
PS0101 5mM HCl(pH 3.0) 1ml
PS0111 磷酸钠缓冲液(Sodium Phosphate) 10mM pH 8.0 1ml
PS0121 磷酸钠缓冲液(Sodium Phosphate) 10mM pH 7.5 1ml
稀释液 PD0021 PBS缓冲液含5%海藻糖pH7.2 (PBS containing 5 % Trehalose ) 1ml