Life Technologies氧化应激产品

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作者:Life官网 发布日期:2014-04-18 11:00

Life Technologies提供了用于细胞功能和健康检测的各种试剂。其中许多分析以荧光或比色法为基础,具有灵敏性、便利性和安全性。这些产品已经过多种仪器平台验证,包括显微镜、流式细胞仪、酶标仪和高内涵筛选,能够实现各种细胞功能的分析:
? 细胞活性和细胞毒性

? 细胞增殖和细胞周期

? 细胞凋亡

? 自噬

? 氧化应激

? 内吞作用和吞噬作用

? 细胞内离子

本文为大家介绍氧化应激的产品。

活性氧(ROS)的产生在好氧生物和健康细胞中是不可避免的。在氧化应激下,ROS急剧上升,使膜脂、蛋白和核酸发生变化。这些生物分子的氧化损伤与衰老以及各种疾病相关,包括动脉粥样硬化、癌症、神经退行性失调等。

Life Technologies提供多种荧光试剂追踪氧化应激各种指标,包括:

? 氧化应激

? 脂质过氧化反应

? 选择性ROS检测

? 谷胱甘肽

? 氧化应激

1.氧化应激

CellROX® 氧化应激试剂——包括CellROX® Green、CellROX® Orange、CellROX® Deep Red和各种套装——是能够可靠地检测活细胞中的ROS的荧光探针。细胞渗透性CellROX®试剂一旦氧化,即可发出明亮荧光。CellROX® Green试剂与DNA 结合(荧光信号主要位于细胞核和线粒体内),而CellROX® Orange和 Deep Red试剂则位于胞质。

采用传统的荧光显微镜、高内涵成像和分析、微孔板荧光光度计或流式细胞仪测量产生的荧光。染色操作过程极为简单,可将试剂直接加入完全培养基或缓冲液中的细胞。与传统的ROS检测染料相比,所有CellROX®试剂的光稳定性极强。此外,经甲醛固定后,CellROX® Green和CellROX® Deep Red试剂仍可保留在细胞内,与用于ROS检测的经典染料相比,分析灵活性更高,操作步骤进一步改善。CellROX®Green染色在去污剂透化作用下亦可保持稳定。

产品特点

A、适用于荧光成像、荧光酶标仪、流式细胞术和高内涵筛选

B、对光漂白作用具有较强的抵抗力

C、多重分析:可与不同荧光素染料相兼容

D、功能多样:适用于活细胞成像或固定样本

图1 人骨肉瘤(U2OS)细胞检测氧化应激。表达CellLight® Actin-RFP的人U2OS细胞以100 μM甲萘醌处理1h。加入5 μM CellROX® Green (C10444)和2滴/ml NucBlue™ Live CellStain ( R37605)于37℃孵育30 min。细胞洗涤后,加入Live CellImaging Solution (A14291DJ)重悬成像。

2.脂质过氧化反应

脂质过氧化反应是将脂类进行氧化降解。ROS是脂质过氧化反应的主要启动者,膜结合的多元不饱和脂肪酸如花生四烯酸和亚油酸是它们的主要靶标。脂质过氧化反应的副产物会直接损伤细胞膜。它们也会形成蛋白加合物,引起细胞和组织损伤。脂质过氧化反应与很多人类疾病有关,如糖尿病、心血管疾病。

图2 使用Click-iT® Lipid Peroxidation Imaging Kit测定氯化血红素在BPAE细胞中诱导的脂质过氧化反应。牛肺动脉内皮细胞(BPAE)细胞接种于35mm玻璃皿中,加入50 μM Click-it® LAA于37℃孵育30min。细胞加/不加10 μM氯化血红素处理2h后,以4%甲醛固定15min、0.05%Triton X-100通透15min,封闭后加入5 μM Alexa Fluor® 488 azide孵育30min,细胞核以Hoechst 33342染色。

3.选择性ROS检测

3ROS如超氧化物、过氧化自由基、过氧化氢、羟自由基和过氧亚硝酸盐等可以与核酸、蛋白和脂类作用,导致细胞和组织损伤。某些ROS与人类疾病有关,如癌症、心血管疾病、神经退行性疾病和衰老。

图3 使用MitoSOX™ Red superoxide indicator检测活细胞中的超氧化物。3T3活细胞经超氧化物清除剂FeTCPP处理(右)或不处理(左),随后标记MitoSOX™ Red试剂,在被超氧化物氧化后可发出荧光。细胞核经Hoechst 33342染色。未处理细胞的线粒体展现红色荧光,表明超氧化物存在,而处理过的细胞则只有微弱的荧光。

4.谷胱甘肽

还原性谷胱甘肽也称为GSH,是与蛋白结合的主要的巯基化合物,此类物质对测定细胞氧化还原状态具有重要作用。因此GSH水平可用于指示氧化还原电位和细胞阻止氧化应激的能力。

图4经ThiolTracker™ Violet染料染色的U2OS细胞。