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首篇抗体特异性验证指南出炉

作者:佚名    发布日期:2018-02-02 11:00


抗体是生物学研究中的最常用的一种工具,广泛应用于与免疫检测相关的研究技术中,包括酶联免疫吸附检测、免疫印迹、免疫沉淀和免疫组化等。同时,抗体也是临床监控的重要工具,可用于相关的诊断和治疗。
 



然而,近年来,科学家们发现,抗体相关研究一直存在严重的“重现危机”。研究使用的抗体在质量和性能一致性方面存在巨大的差异,对生物医学研究的可重复性造成了显着的不良影响。


想要改善这一困境,加强抗体验证是最有效的途径之一。然而,遗憾的是,很长一段时间内,业界都没能建立全面、统一、规范的验证策略和科学框架。许多研究者呼吁出台相关的标准,以确保抗体在特异性和质量上的一致性。


国际抗体验证工作组(International Working Group for Antibody Validation,IWGAV)在Nature Methods上发表了首篇关于验证抗体特异性策略的提议,确定了五大“支柱策略”(具体如下),用以指导特定应用中的抗体验证。


1.基因策略:利用CRISPR/Cas或RNAi等技术,将对照细胞或组织中的目标基因敲除或敲低,并检测这些对照细胞或组织中的相关信号。


2.正交策略:使用非抗体依赖方法对大量样品进行定量,并检测基于抗体和非抗体定量间的相关性。


3.独立抗体策略:使用2种或多种可识别目标蛋白表面不同抗原决定簇的独立抗体,并通过对比或定量分析确定特异性。


4.标签蛋白的表达:为内源性目标基因添加亲和标签或荧光蛋白标签,利用抗体检测方法可对来自标签蛋白的信号进行校正。


5.免疫捕获及质谱分析(MS):免疫沉淀(IP)技术可通过使用与目标蛋白特异性结合的抗体分离出目标蛋白,其与MS分析结合(IP-MS)可识别与纯化抗体直接发生相互作用的目标蛋白以及可能与目标蛋白形成复合物的蛋白。


对抗体的验证可以确保抗体特异性识别目标抗原、性能不受时间影响,并且最终所有使用者都可以根据正确的实验方案得到相同的结果。IWGAV提出的这一验证策略初步建议向着验证抗体特异性和实现研究的可重复性迈出了坚实的一步。

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