alamarBlue的用法

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http://www.liankebio.com/article-information_Tech-1616.html

作者:联科生物 发布日期:2008-04-17 13:00

贴壁细胞和非贴壁细胞都适用。所有操作在无菌条件下进行。避免污染细胞,因为微生物污染也会还原alamarBlueTM,培养基中应添加抗生素如青霉素G(1U/ml)、两性霉素B(amphotericin B,0.0025ug/ml)。

氧化还原指示剂是pH敏感的,推荐使用磷酸缓冲液。10%胎牛血清对比色法检测无影响,但是会淬灭部分荧光;因此,用荧光法检测时对照溶液中需添加10%BSA。酚红对检测也有一定影响,结果会上调0.03%。一般来说,应使用非还原性的培养基,如RPMI1640、Hank’s-Eagle或 Dulbecco’s-Eagle。

在特殊系统中使用时,细胞密度、孵育时间、培养基成分及使用浓度等条件需要先优化。

收集需检测的细胞,以优化的密度铺于加入10%(v/v)alamarBlueTM的新鲜培养基上,

1、 细胞培养:RPMI培养基,添加HEPES、10%胎牛血清、1%谷氨酸盐、适当的抗生素;

2、 细胞覆盖率达80%时,用胰酶消化铺于微孔板中,密度在每孔825~80000个细胞。

3、 1个小时后,加入alamarBlueTM,37℃ 5%CO2培养

4、 到预定的时间点后检测alamarBlueTM的还原情况

注意:若检测的还原度不够,可选择继续培养再检测,这是该方法的一大优越之处

研究特殊药物对细胞周期的影响(如roscovitine,一种抗癌药、周期蛋白激酶抑制剂),胰酶消化细胞、收集并铺于含药物的培养基上,37℃ 5%CO2培养2天;除去之前的培养基换上含10%(v/v)alamarBlueTM的新培养基,在预定的时间点检测其还原度。