ELISA 实验中常见样本的处理方法及注意事项

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ELISA 实验中常见样本的处理方法及注意事项

众所周知,ELISA 是蛋白定量检测的金标准。但是样本的采集、处理及保存方法对 ELISA 实验的成功有至关重要的作用。所以为了您ELISA 实验准确、顺利的进行,现利用我们公司在 ELISA 实验中积累的精益技术和丰富经验,将在 ELISA 实验中遇到的常见样本采集、处理、保存方法予以归纳、汇总,为您实验的成功打好基础。另外,针对不同的检测试剂盒或许有不同的样本处理方法,请参照您所购买试剂盒中的处理方法。特殊样本的具体采集处理保存方法请参考我们联科生物官网上的文章或相关参考文献。
常见样本采集方法:

血清:全血在室温自然凝固30分钟后,1000g离心30分钟,小心收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

血浆:根据试剂盒要求选择合适的抗凝剂,与全血混合 20 分钟后,1000g离心30分钟,小心收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

细胞培养上清:将细胞培养液300 g离心10分钟去除沉淀物,,仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

所有标本收集完成后,应及时分装放在-20℃或-70℃条件下保存,避免反复冻融。如果在24 小时内检测,样本可以存放在 2-8℃。在分析前,冷冻样本应该缓慢的恢复至室温,轻柔地混匀。

注意事项:

(1)要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团,其有类似过氧化物的活性,因此,在以 HRP 为标记酶的 ELISA 测定中,如血清标本中血红蛋白浓度较高,则其就很容易在温育过程中吸附于固相,从而与后面加入的 HRP 底物反应显色。

(2)样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染。一则细菌所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用;二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶会对用相应酶标记的测定方法产生非特异性干扰。

(3)血清样本如果是以无菌操作分离,则可以在2~8℃下保存一周,如为有菌操作,则建议冰冻保存。样本的长时间保存,应在-70℃以下冻存。

(4)冰冻保存的血清样本须注意避免反复冻融。样本的反复冻融所产生的机械剪切力会对样本中的蛋白等分子产生破坏作用,从而引起假阴性结果。此外,冻融样本的混匀亦应注意,不要进行剧烈振荡,反复颠倒混匀即可。

(5)样本保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时,应离心沉淀后取上清检测。