一、荧光补偿调节（以 Annexin V-FITC/PI 为例）

在流式细胞仪上，用空白管调节 FSC vs. SSC (linear) 散点图显示细胞并设门圈出目的细胞群。上 Annexin V-FITC 单染管，调节 PI-FITC的补偿，使阴性细胞群中位数等于阳性细胞群的中位数；上 PI 单染管，调节 FITC-PI的补偿，使阴性细胞群中位数等于阳性细胞群的中位数 (见下图 1)，简言之就是让细胞呈现横平竖直状态。

图 (1) Annexin V-FITC/PI 补偿图：FSC vs. SSC (linear) 散点图显示细胞并设门圈出目的细胞群；上 Annexin V-FITC 和 PI 单染管，调节 FITC和 PI的补偿，使阴性细胞群中位数等于阳性细胞群的中位数。

二、样本圈门

在流式细胞仪上，FSC vs. SSC (linear) 散点图显示细胞并设门圈出目的细胞群。建立 FITC-H vs. PI-H (log) 双参数散点图，根据对照组染色后的在流式细胞仪上分析的结果来设定十字标尺位置 (见下图 2)。

图 (2) Annexin V-FITC/PI 凋亡图：FSC vs. SSC (linear) 散点图显示细胞并设门圈出目的细胞群；FITC-H vs. PI-H 双参数散点图主要显示三群细胞：正常细胞(Annein V-FITC-/PI-)、早期凋亡(Annein V-FITC+/PI-)、晚期凋亡(Annein V-FITC+/PI+)。

掌握这两步，就能精准区分正常细胞、早期凋亡和晚期凋亡细胞群啦！补偿调节是基础，圈门设置看对照，关键细节都标好了，赶紧存图对照操作。觉得有用别忘了转发给实验室小伙伴，一起让流式数据更靠谱～