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荧光素是一类能吸收特定波长光并发射出更长波长荧光的物质，是流式细胞术实现信号检测的“核心载体”。在流式细胞术实验中，荧光素的选择直接影响实验结果的准确性和分辨率。不同荧光素有着特定的激发和发射波长，只有精准匹配激光器和滤光片，才能高效捕获荧光信号。今天就为大家整理了联科生物常用流式荧光素的核心光谱参数，附上详细表格，帮你轻松搞定荧光素选择难题！
一、流式荧光素基础知识：1分钟搞懂荧光素类型
流式荧光素作为流式细胞术的“信号探针”，其性能直接决定实验数据质量。从结构与特性来看，主要可分为三类：
- 小分子有机荧光素：如FITC、PI，具有分子量小、标记位点多的特点，但光稳定性相对较弱，适用于常规基础实验。
- 藻胆蛋白类：如APC、PE，源自藻类，荧光亮度极高（是FITC的10-30倍），光稳定性好，尤其适合弱表达抗原检测，是多色流式实验的核心选择。
- 串联荧光素：如PE-Cy5、APC-Cy7，由藻胆蛋白与小分子荧光素通过化学链接形成，可吸收短波长光并发射长波长荧光，极大拓展了多色标记的光谱范围，但需注意保存条件以防解偶联。
联科生物针对不同实验需求，对荧光素进行了优化升级，例如其mFlour系列荧光素在光稳定性和抗淬灭能力上表现优异，violetFluor系列则专为紫激光流式细胞仪设计，实现了信号强度与实验稳定性的平衡。
二、联科生物荧光素光谱参数核心表：按激光类型分类，查起来更方便
以下是联科生物15种常用流式荧光素的激发波长（Ex）和发射波长（Em）汇总，数据综合了产品特性与流式实验常规应用场景，供大家参考：
| 激光类型 | 荧光素名称 | 激发波长（nm） | 发射波长（nm） | 备注 |
|---|---|---|---|---|
| 405nm紫激光 | mFlour 450 | 405 | 445 | 紫激光激发，蓝色发射 |
| mFlour 540 | 405 | 540 | 紫激光激发，黄绿发射 | |
| mFlour 610 | 405 | 613 | 紫激光激发，橙红色发射 | |
| violetFluor 450 | 405 | 450 | 紫激光激发，蓝色发射 | |
| 488nm蓝激光 | FITC | 495 | 519 | 经典绿色荧光素，488nm激光可激发 |
| PE | 488 | 575 | 藻红蛋白，橙色荧光，亮度高 | |
| PE-Cy5 | 488 | 670 | 串联荧光素，红光发射，需注意光谱重叠 | |
| PE-Cy7 | 488 | 775 | 串联荧光素，近红外发射，多重标记常用 | |
| PerCP | 488 | 675 | 多甲藻叶绿素蛋白，红光发射 | |
| PerCP-Cy5.5 | 482 | 676 | 串联荧光素，蓝色激光激发，红光发射 | |
| 7-AAD | 488/546 | 647 | 核酸染料，常用于分析凋亡 | |
| PI | 488/536 | 617 | 核酸染料，橙红色荧光，常用于细胞周期分析 | |
| 633/647nm红激光 | APC | 633/647 | 660 | 藻胆蛋白，红光激发，荧光强度高 |
| APC-Cy7 | 633/647 | 780 | 串联荧光素，近红外发射，适用于多重标记 | |
| redFluor 710 | 633/647 | 710 | 红光激发，近红外发射 |
三、荧光素与流式仪器的搭配要点：新手也能学会的匹配技巧
流式细胞仪的核心配置是激光器和滤光片，荧光素的选择需与仪器配置精准匹配，才能实现最佳信号采集。以下是常见仪器配置与荧光素搭配方案：
1. 激光器与荧光素匹配原则：认准激光波长，选对不踩雷
流式仪器常用激光器波长为405nm（紫激光）、488nm（蓝激光）、633/647nm（红激光），不同激光器对应激发的荧光素需严格对应：
- 405nm紫激光：匹配激发波长在380-420nm的荧光素，如联科生物的mFlour 450、mFlour 610、violetFluor 450，需搭配450/50、610/20等滤光片接收信号。
- 488nm蓝激光：覆盖激发波长450-500nm的荧光素，如FITC、PE、PE-Cy5、PerCP等，对应滤光片为525/50（FITC）、585/40（PE）、670/30（PE-Cy5）等。
- 633/647nm红激光：激发波长620-650nm的荧光素，如APC、APC-Cy7、redFluor 710，需使用660/20（APC）、780/60（APC-Cy7）等滤光片。
2. 多色实验仪器搭配技巧：不同激光配置，这样组合更高效
进行多色标记实验时，需结合仪器的激光器数量和滤光片组合，遵循“荧光素亮度从高到低匹配抗原表达量从低到高”的原则：
- 若仪器为“405+488+633”三激光配置，可选择violetFluor 450（405nm）、PE（488nm）、APC-Cy7（633nm）的组合，避免光谱重叠严重的荧光素搭配（如FITC与PE）。
- 对于只有488nm单激光的仪器，优先选择FITC（绿）、PE（橙）、PE-Cy5（红）的组合，利用不同发射波长的滤光片区分信号。
四、关键使用小贴士：避开这些坑，实验更顺利
- 激光匹配：405nm紫激光适用于mFlour 450、mFlour 540、mFlour 610、violetFluor 450；488nm蓝激光对应FITC、PE、PE-Cy5等；633/647nm红激光则用于APC、APC-Cy7等。
- 光谱重叠：串联荧光素（如PE-Cy5、APC-Cy7）可能存在解偶联现象，实验中需注意补偿调节，避免信号干扰。PE-Cy5、PE-Cy5.5对APC通道的溢漏很大，尽量不要同时使用。
- 实验选择：高亮度荧光素（如PE、APC）适合弱表达抗原检测；近红外荧光素（如APC-Cy7、PE-Cy7）可减少自发荧光干扰，适用于复杂样本分析。
你在使用联科荧光素做流式实验时，有哪些独家小技巧？或者对哪款荧光素的使用还有疑问？欢迎在评论区留言分享交流！
