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你的“枪”,你真的懂他吗?(下篇)

作者:联科生物    发布日期:2020-07-02 09:00


上一篇我们介绍了移液器的维护、校准,大家是否认识到,原来每天都要用的“枪”,并没有想象的那么简单!
那么今天,我们将推出下篇,介绍移液器的使用。良好的移液操作规范,是实验成功的开始!
一次移液操作,看似短短几十秒的瞬间,实际却可分解为装吸头、量程设定、润洗吸头、吸液、排液和吹液、以及退吸头六个步骤。
 

 

第一步:装吸头

√  正确操作:

移液器套柄用力下压并小幅度旋转即可

×  错误操作:

用力敲击吸头。这样操作的后果是:

1. 吸头变形影响准确性;

2. 套柄在强力摩擦下磨损,影响密封,从而影响准确性;

3. 小量程移液器的套柄比较细,用力敲击可能会损坏套柄。

该步的不规范操作,在很多实验室经常能看到,可能大家习以为常,然而长此以往就会影响移液器的寿命和准确性!
★  该步骤不规范的移液操作可能带来0.1%到5%的移液误差,甚至更高!

 

第二步:量程设定

1.量程的设定原则:由大到小

1. 1 由大量程向小量程调节时:

如从600μl调节至400μl,直接调节

1.2.  由小量程向大量程调节时:

先朝所需量程方向连贯旋转,旋转到达超过所需量程1/3圈处,回调到所需量程处

如从20μl调节至50μl,先调节至53μl,再回旋至50μl

这是因为由小量程向大量程调节时,弹簧的弹性形变在短时间内无法完全回复,需有一个恢复阶段,可以想象一下刚从沙发上起身时,沙发垫恢复原状也是需要一定时间的。

★ 正确的量程设定可以提高0.5%的移液准确性!

2.量程范围的选择:

选择量程时,需要注意,一般在 10% - 100% 量程范围内可以操作,但在 10% 量程操作需要较高的操作技巧。因此建议的最佳量程是35% - 100% 量程范围。在此量程范围,对操作技巧依赖更少,并保证移液的准确性和精度。从表中可以看出,当选择的量程越小,移液的准确性和重复性就会越差。

★ 选择合适的吸头量程,可提高1%移液准确性!


第三步:润洗吸头

用同一样品对吸头进行润洗。先吸取样品,然后排回样品池或废液槽。充分吸液排液2-3次。

润洗的作用:

1. 在吸头内形成同质膜,降低吸头对样品的吸附;

2. 有助于提高吸头多次相同移液操作的一致性。

注意:对于高温/低温样品,由于热胀冷缩带来更大的误差,不建议润洗。

★ 润洗吸头可提高0.5%的移液准确性!

 

第四步:吸液

此步影响移液准确性的因素主要有以下4点:

1. 吸头浸入角度

建议尽量保持垂直,倾斜角度不大于15°。

正确的移液角度,可提高2.5%移液准确性!
 

2. 吸头的浸入深度

移液器量程
吸头浸入深度
10μl及以下
1mm
20μl – 100μl
2 – 3mm
200μl – 1000μl
3 – 6mm
2000μl及以上
6 – 10mm

吸头的外壁会粘上液体,尤其是液体较粘稠时,对准确性影响更大!

★ 以正确吸头浸入深度进行吸液操作可提高1%的移液准确性(微量程移液器可达5%)!


3. 吸头浸入时间

吸液后保持吸头浸入液面最少1秒,然后将吸头平缓移开液面。对吸取大容量样品或者高粘度样品尤为重要。


4. 吸液速度

吸液通常采用一档吸液、二挡排液,在吸液时保持平顺,缓慢松开活塞,控制好吸液速度。过快的吸液速度,会导致形成气柱,使移液不准确;样品液进入套柄,对活塞和密封圈造成损伤;带入气雾,造成样品交叉污染。

★ 不正确的吸液速度会导致至少5%的准确性下降!


第五步:排液和吹液

先将排液按钮按至第一档(排液档),略作停顿以后,再按至第二档(吹液档)

常规排液操作:

1. 沿内壁排液(常规)

2. 直接排入液面下

   直接排入液面排液时要保持活塞下压再离开液面,否则容易导致倒吸!

3. 在液面上方排液

★ 正确的排液技术提高1%的移液准确性!

操作一致性

保持一致的移液节奏,使活塞下压的速度和平稳一致

为了达到最好的操作一致性,可选择使用电动移液器,减少人为操作的影响

操作的一致性可提高1%的移液准确性!

窍门:反向移液模式

适用于高粘度、挥发性的样品,如甘油、乙醇等,提高移液的准确性

同常规移液操作相反的流程,即二挡吸液、一档排液,具体操作请见下方


•  常规正向移液分为4步:

1. 将按钮从准备位置压到第1档;

2. 吸液:缓慢释放按钮,回复至准备位置;

3. 排液:将按钮从准备位置压到第1档,略作停顿后,将按钮压到第2档;

4. 松开按钮,回复至准备位置。

•  反向移液分为5步:

1. 将按钮从准备位置压到第2档;

2. 吸液:缓慢释放按钮,回复至准备位置;

3. 排液:将按钮从准备位置压到第1档;此时已完成所需体积液体的移液。

4. 将按钮从第1档压到第2档,回收或弃去吸头中残留的液体;

5. 松开按钮,回复至准备位置。
 

移 液 小 结

 
误差大小 误差范围 % 技术操作
1.0%- 5.0%
吸头浸入深度/角度不正确(特别注意微量程移液器)
错误的吸液速度
0.5% -1.0%
选择合适的量程
吸头浸入深度
吸液速度
排液技术
一致性
小于 0.5%
量程设定 (已选合适量程)
吸头浸入角度
润洗
手温影响


好了,本期的移液器操作介绍就到此为止了,希望能给您的实验带来帮助!
后续将会给大家带来关于ELISA原理、操作、分析等方面的介绍

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