操作篇:Westernblot 各种样本处理及保存

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作者:联科生物 发布日期:2016-12-26 09:30

操作篇:Westernblot 各种样本处理及保存
做WB之前,样本的处理及保存至关重要,本章节整理WB各种样本,如细胞、组织、植物和细菌样本的处理及保存方法,供参考。

? 细胞样本

1、 悬浮细胞

1) 把细胞及培养液一起收集到15ml或者50ml离心管中,1500rpm离心3min,弃去上清;

2) 加入PBS轻轻吹打,1500rpm离心3min,弃去上清;

3) 反复3次,弃去上清后于-80度或者液氮冻存待用。

2、 贴壁细胞

1) 胰酶消化:用胰酶将细胞消化后,收集到15ml或者50ml离心管中,1500rpm离心3min,弃去上清;

2) 加入PBS轻轻吹打,1500rpm离心3min,弃去上清;

3) 反复3次,弃去上清后于-80度或者液氮冻存待用。

3、 细胞刮子收集细胞

某些蛋白(即对胰酶比较敏感或者实验特殊要求,如E-Cadherin不易用胰酶消化后进行WB检测),直接用细胞刮子刮下细胞。

1) 将刮下的细胞收集到离心管中,1500rpm离心3min,弃去上清;

2) 加入PBS轻轻吹打,1500rpm离心3min,弃去上清;

3) 反复3次,弃去上清后于-80度或者液氮冻存待用。

动物组织样本

1) 取下合适组织样品后用预冷的PBS或者生理盐水漂洗,尽量除尽残留血液,用滤纸把多余PBS吸取干净;

2) 把组织分成约100mg大小(依据实验目的需要进行调整),用锡纸分别包装好或者用冻存管装好,于-80度或者液氮中保存。

植物样本

取得待测植物样品后,用蒸馏水把泥土漂洗干净,用滤纸把多余水分吸取干净,分装成合适大小于-80度或者液氮中保存。

细菌样本

1) 细菌培养完成后,10000rpm离心5min收集细菌,加入PBS吹打,10000rpm离心5min,弃去上清;

2) 反复3次,弃去上清后于-80度或者液氮冻存待用。

温馨提示:以上样本检测磷酸化蛋白,建议新鲜样本提取蛋白,提取后的蛋白加Loding buffer煮沸10min,如果短期内做可以-20度保存,长时间-80度保存。请在3个月内进行,长时间保存样品容易使磷酸化蛋白去磷酸化而检测不到磷酸化条带。

注意:

(1)提取胞浆、胞核蛋白的样品应尽量采用新鲜样品,冻存样品提取的胞核蛋白可能会减少;

(2)样本保存在-80或液氮也要避免反复冻融,建议尽快检测;

(3)长距离运送样品时采用干冰或者液氮。

WB技术服务电话咨询:400-6721-600 邮箱:inf@liankebio.com 杭州联科生物技术服务股份有限公司