在免疫学研究领域，巨噬细胞作为"免疫哨兵"，其活化状态、极化方向及细胞因子分泌水平直接反映机体免疫应答的动态变化。无论是炎症疾病机制探索，还是肿瘤免疫治疗研发，精准检测巨噬细胞的功能特征都至关重要。本文将系统解析两种核心检测技术——ELISA与流式细胞术的实验要点，并推荐高性价比的检测产品，助力科研人员高效开展实验。
一、核心检测技术解析
1. 流式细胞术：巨噬细胞分型的"可视化工具"
流式细胞术能够快速分析巨噬细胞的表面标志物表达，实现M1/M2极化分型。典型的实验方案如下：
（1）细胞制备：从组织中分离单细胞悬液或收集培养细胞，用PBS洗涤2次，调整细胞浓度至1×10⁶ cells/ml。
（2）染色方案：表面标志物染色常用CD11b（巨噬细胞通用 marker）、F4/80（小鼠巨噬细胞特异性 marker）、CD86（M1型 marker）和CD206（M2型 marker，染色前需破膜处理），加入荧光标记抗体请按抗体说明书进行孵育，洗涤后上机检测。
（3）数据分析：通过FlowJo软件圈门分析，先排除死细胞和杂质，再根据CD11b和F4/80阳性筛选巨噬细胞群体，最后统计CD86⁺CD206⁻（M1）和CD86⁻CD206⁺（M2）细胞的比例。
（4）小鼠流式常用的检测方案推荐
2. ELISA检测：细胞因子定量的"金标准"
ELISA技术凭借高特异性和灵敏度，成为检测巨噬细胞分泌的细胞因子（如M-CSF、TNF-α、IL-6等）的首选方法，可精准量化细胞因子水平以反映巨噬细胞功能活化状态。以巨噬细胞相关细胞因子TNF-α检测为例，标准实验流程如下：
（1）样本制备：收集血清、血浆、细胞培养上清或组织匀浆上清，避免反复冻融（建议分装后-80℃保存），确保样本澄清无杂质。
（2）实验操作：采用双抗体夹心法，按照试剂盒说明书操作，终止后读取450nm主波长的OD值和570nm或630nm校准波长的OD值。
（3）数据分析：①拟合标曲（选择R2值大于0.99的比较好的拟合方式，必要时可以删除个别差异较大的标曲点进行拟合，直线或曲线拟合都可以）；②计算样本值，将样本减去空白孔的OD值复制，选软件中的“粘贴”，得到的X值再乘以相应的稀释倍数就是最终的浓度值。（用的分析软件是ELISAcal，需要软件请写留言“分析软件+邮箱地址”）
（4）关键控制点：标准品需严格按说明书稀释以建立准确标准曲线；样本稀释倍数需通过预实验确定，避免超出检测线性范围；孵育温度和时间需精准控制，确保反应充分且结果重复性良好。
（5）相关的产品推荐
二、实验常见问题与解决方案
1. ELISA检测OD值偏低：样本中目标因子浓度过低、洗涤步骤过度导致结合物流失、显色液反应时间不足，若样本浓度低可适当加大样本上样体积降低稀释倍数；洗涤时控制洗液量和次数，避免酶标孔干燥；适当延长显色时间，肉眼观察，标曲S5孔有淡蓝色、Blank孔无明显蓝色时，即可终止。
2. 巨噬细胞分型结果不稳定：需严格控制细胞培养条件（如细胞密度、刺激因子浓度），染色时确保抗体浓度一致，建议同一批次实验完成所有样本检测。
选择合适的检测技术和产品是巨噬细胞研究成功的关键。以上推荐产品可满足不同实验需求，9-10月开学季还有优惠活动，如果您在实验设计或试剂选型上有疑问，欢迎在评论区留言，我们将及时为您解答！
