血清OR血浆,哪个是ELISA的菜

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常有客户来问“我要做ELISA,血液样本是用血清还是血浆?”今天,我们从血清血浆的制备和区别来看看如何选择?

一、血清、血浆的概念及区别

人体或者实验动物抽出来的血称为全血,里面含有血浆、血小板以及红细胞、白细胞等各类细胞。

血清是血液凝固析出的淡黄色透明液体。如将血液自血管内抽出,放入试管中,不加抗凝剂,则凝血反应被激活,血液迅速凝固,形成胶冻状凝血块。凝血块收缩,其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清,也可于凝血后经离心取得。在凝血过程中,纤维蛋白原转变成纤维蛋白块,所以血清中无纤维蛋白原,这一点是与血浆最大的区别。

血浆是离开血管的全血经抗凝处理后(常见的抗凝剂如EDTA、枸橼酸钠、肝素等),通过离心的方法,从而获得的上层不含细胞成分的液体,血浆含有纤维蛋白原(纤维蛋白原能转换成纤维蛋白,具有凝血作用)。

产生血清的凝血过程,是凝血因子按一定顺序激活,最终使纤维蛋白原转变为纤维蛋白,纤维蛋白单体相互连接形成不溶于水的纤维蛋白多聚体,并彼此交织成网,将血细胞网罗在内,最终形成血凝块的过程。所以,血清中不含血细胞,也不含有纤维蛋白,只有少数几种凝血因子(Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ)。

血浆是阻止凝血过程的发生,并通过离心沉淀细胞后的液体部分,里面含有纤维蛋白原和各种凝血因子(正常人体血浆当中至少含有除凝血因子Ⅲ外的其余11种凝血因子)。

此外,钙离子在血清中的浓度也明显低于血浆,因为钙离子也参与体内凝血的过程,在凝血过程中消耗较大。

而其他成分,比如白蛋白,球蛋白,糖类,脂类,维生素,激素,除钙离子外的其他无机盐,血清和血浆中差不多。

所以我们在判定选血清还是血浆样本时,主要看所测指标是否是凝血功能类指标,若是检测凝血功能类指标最好选择血浆样本。对于其他类型指标,如细胞因子、激素等指标,通常情况下血清或血浆都可以。

二、ELISA实验前,血清和血浆的制备

血清样本:离心管收集全血。血样凝集30分钟后,1,000 × g 离心10分钟,取上清,对上清进行分装保存。-20℃保存,1个月。-80℃,保存3个月。

血浆样本:EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝管收集全血。1,000 × g 离心管30分钟,取上清,对上清进行分装保存。-20℃保存,1个月。-80℃,保存3个月。

三、ELISA样本的溶血现象

另外,我们在ELISA血液样本准备过程中,要避免溶血现象的发生。溶血,即血液中红细胞因为内外界各种原因破裂,红细胞中血红蛋白逸出,导致血清、血浆由淡黄色变为血红色。

溶血过程中,红细胞其他成分也一样逸出,会对一些检查指标的含量产生影响,比如乳酸脱氢酶、肌酸激酶等会显著升高。

此外,可能是因为样本中游离的血红蛋白非特异性吸附在酶标板上,血红蛋白中的亚铁血红素具有类似过氧化物酶的活性,会催化ELISA最后一步酶促反应中的底物TMB,引起假阳性。

实验过程中如果发生溶血现象,尽可能重新采血。若无法重新采血,只能根据自身需要测量的指标,将溶血与非溶血样本进行对照试验,判断是否有影响,结果是否可信。

上面提到,血清和血浆的主要区别是纤维蛋白和几种凝血因子的不同。凝血因子除12种主要凝血因子(凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ、Xll。因子VI事实上是活化的第五因子,已经取消因子VI的命名。)外,还有辅助凝血因子。

联科生物有下面两款与凝血因子相关ELISA的试剂盒: