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开学大促!!固定破膜剂买一送一

作者:小科    发布日期:2020-09-14 10:00


 

说起流式细胞术

有一种应用叫做细胞免疫分型分析

表面抗原or胞内/核内抗原

检测胞内/核内抗原时,破膜是必不可少的一环

 

为 何 要 破 膜 ?


正常情况下,荧光标记的抗体无法通过完整的细胞膜进入细胞内,因而无法检测胞内抗原。破膜,就是利用破膜剂破坏细胞膜的完整性,给细胞膜打上足够大的孔,使抗体可以进入细胞内,进而特异性结合目的蛋白。


 

何 为 破 膜 剂 ?


通常所说的破膜剂包括固定剂(如多聚甲醛,固定细胞膜)和去污剂(如皂素、Tween-20和Triton-x等,给细胞膜打孔)。相对于Tween-20和Triton-x,皂素的破膜会更温和一些,破膜过程是可逆的,能保证膜表面抗原的完整性,但不可破核膜。

 

破 膜 剂 应 用 — 胞 内 抗 体 染 色


1. 制备好细胞悬液,取100 μl(全血样本:人100 μl,小鼠30~50 μl)染表面抗体,室温避光孵育15 min,不用洗涤;

2. 加入100 μl FIX&PERM MEDIUM A固定剂,室温孵育15 min;

3. 加入3 ml流式染色缓冲液,300 g离心5 min,弃上清,涡旋振荡,使残留液体混匀沉淀;

4. 加入100 μl FIX&PERM MEDIUM B破膜剂和胞内抗体(和/或相应的同型对照),室温避光孵育15 min;

5. 加入3 ml流式染色缓冲液,300 g离心5 min,弃上清收集细胞;

6. 用500 μl 流式染色缓冲液重悬细胞,上机检测并分析。

注意:如不能立即检测,用0.5 ml 0.1%~4%多聚甲醛重悬,4℃避光保存,24 h内上机分析。
 


 

[  破 膜 剂 开 学 大 礼 包  ] 


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目录号

产品名称

规格

目录价

70-GAS003/2

Fix & Perm Kit 固定破膜剂

50T

560

70-GAS005/2

Fix & Perm Kit固定破膜剂

100T

1060

70-GAS006/2

Fix & Perm Kit固定破膜剂

200T

1960

 

备注:破膜剂包含A液和B液两种组分,可将细胞固定、减少对表面抗原的影响,并增加细胞膜的通透性,使荧光素标记的抗体可通过细胞膜与抗原结合。同时B液还可高效裂解红细胞,无需另外处理,减少对细胞的影响。

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