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凋亡检测8大要点

作者:联科生物    发布日期:2020-08-04 09:00


细胞凋亡(Apoptosis):属于细胞程序性死亡(Programmed Cell Death,PCD),是为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡,属于细胞的“自杀”行为。蝌蚪褪去尾巴变成青蛙就是生物学中典型的细胞凋亡现象。



 

——  凋 亡 异 常 与 常 见 疾 病   ——



 


——  细 胞 凋 亡 典 型 特 征  ——  ​​​​​​​

早期事件:

۞ 磷脂酰丝氨酸(PS)外翻;

۞ 线粒体受损;

۞ 细胞色素C释放

中期事件:

۞ Caspase活化

晚期事件:

۞ DNA片段化

 


——   Annexin V 检 测 凋 亡 八 大 要 点  ——  ​​​​​​​


1. 接种——对数生长

细胞密度通常不超过1×106/ml,以免引起凋亡

2. 收集——上清消化全收

因部分凋亡细胞可能悬浮于培养基中,须先收集上清,离心收集沉淀,再消化收集贴壁细胞,合并上清和消化下来的细胞。

3. 消化——选用Accutase酶

选用Accutase酶替代胰酶,在多种细胞系中得到验证,消化更温和、长时间消化也没有影响,有效避免因消化过度使PS外翻,造成假阳性。(对凋亡不明显的实验强烈推荐)
 

4. 补偿调节——阳性质控

没有明显的凋亡,该如何调节补偿以及设门?联科生物凋亡试剂盒配备阳性质控液,使补偿调节so easy。
 

5. 电压——足够大

大到快要超出边界。

6. 细胞数量——足够多

多到细胞全部收集。

7. 补偿——横平竖直

3、4象限横平;2、4象限竖直

8. 漂亮结果——黄金分割(三分原则)

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