凋亡检测8大要点

  • Post category:生物资讯
  • Post views:4197 次访问

细胞凋亡(Apoptosis):属于细胞程序性死亡(Programmed Cell Death,PCD),是为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡,属于细胞的“自杀”行为。蝌蚪褪去尾巴变成青蛙就是生物学中典型的细胞凋亡现象。

凋亡异常与常见疾病


细胞凋亡典型特征

早期事件
1 磷脂酰丝氨酸(PS)外翻
2 线粒体受损
3 细胞色素C释放
中期事件
Caspase活化
晚期事件
DNA片段化

Annexin V 检测凋亡八大要点

1. 接种——对数生长

细胞密度通常不超过1×106/ml,以免引起凋亡。

2. 收集——上清消化全收

因部分凋亡细胞可能悬浮于培养基中,须先收集上清,离心收集沉淀,再消化收集贴壁细胞,合并上清和消化下来的细胞。

3. 消化——选用Accutase酶

选用Accutase酶替代胰酶,在多种细胞系中得到验证,消化更温和、长时间消化也没有影响,有效避免因消化过度使PS外翻,造成假阳性(对凋亡不明显的实验强烈推荐)。

4. 补偿调节——阳性质控

没有明显的凋亡,该如何调节补偿以及设门?联科生物凋亡试剂盒配备阳性质控液,使补偿调节so easy。

5. 电压——足够大

大到快要超出边界。

6. 细胞数量——足够多

多到细胞全部收集。

7. 补偿——横平竖直

3、4象限横平;2、4象限竖直

8. 漂亮结果——黄金分割(三分原则)