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你的“枪”,你真的懂他吗?(上篇)

作者:联科生物    发布日期:2020-06-09 16:00



 

各位科研汪们是否遇到过这样的困扰:

有时候同一个实验,今天做的结果跟昨天做的结果差异很大;

今天做得出来结果,明天又做不出来;

自己做的跟师兄师姐做的又不一样;

有的实验,复孔间差异很大,该选择哪个数据,抑或两个都不准?

这个时候,是否会感到脑壳疼,实验受挫的无奈和无力感让我们身心疲惫?
 

当然问题总是要去解决的,否则也对不起咱们科研汪的称号了。我们除了去反复核对实验方案、实验操作、试剂等信息外,是否会考虑到手中的“枪”呢?
 


工欲善其事必先利其器,无论行军打仗抑或舞文弄墨,手上的工具是否合格、合适,操作是否合理,对结果可是影响不小。而咱们科研汪每天都要用的“枪”,说他在某种程度上影响了实验结果,可一点都不为过,尤其对于灵敏度很高的实验,如ELISA、分子等,更是有差之毫厘谬以千里的影响。
 


那么如何爱惜维护我们的“枪”呢?首先我们了解一下“枪”的原理结构,才能有的放矢。


所谓“枪”,专业术语称为移液器,是指具有一定量程范围,可将液体从容器内吸出,移入另一容器内的计量工具。作为计量器具,需要做好维护保养、校正,才能保证移液的准确性。


移液器有空气置换式(常用型)和外置活塞式 (特殊型)。前者适用于在标准实验室条件下,转移常规水性溶液;后者适用于转移非水性的特殊液体。
 

移液器

图解

优点

缺点





  ● 在标准的实验室温度与压力条件下准确分配水性溶液
  ● 移液技巧可最大限度的减少误差
  ● 一次性吸头价格较低
  ● 人体工程学作用力较小

  ● 需要更多的培训、练习方可确保精准度

  ● 当样品接触活塞时,移液器可能会受损或污染

  ● 出现下列情况时不准确:

       1、样品与实验室温度不同

       2、样品粘度或密度与水不同

       3、样品挥发度高

       4、湿度低/蒸汽压力高





  ● 准确分配水性、挥发性、密致性与粘性溶液。对温度、大气压力或湿度/蒸汽压力不敏感

  ● 无需太多培训即可获得精准结果

  ● 采用一次性外置活塞吸头系统,可防止移液器受到污染与损坏

  ● 一次性外置活塞吸头成本较高
  ● 人体工程学作用力较大

 

那么小科就以实验室常用的空气置换式移液器为例,介绍一下他的原理和结构。

说来大家也不陌生,空气置换式移液器利用的是空气置换原理:
活塞通过弹簧的伸缩运动来实现吸液与排液。活塞推动下,排出部分空气,利用
活塞拉力及大气压吸入液体。再由活塞推力排出液体。


与活塞密切关联的就是密封圈和弹簧了,前者保证气密性,后者调节移液体积。

 

因此,小科建议各位科研汪们做好以下维护:

1. 正确放置

 

● 当天用完应调回最大量程,放置于移液器支架上。否则弹簧长期处于压缩状态,对于弹性形变会造成影响,从而导致移液结果不准。(想想坐久了的沙发,你就明白了)
 
● 实验间隙放置于移液器支架上有利于避免手温影响。

2. 保持清洁

    ● 外部清洁:日常清洁剂(肥皂液、洗洁精等)擦洗,然后用双蒸水擦净晾干。既可以保持美观,又能避免样本的交叉污染。

    ● 内部清洁:

       a) 下半部分拆卸下来;

       b) 塑料部件(套柄等)采用与外部清洁一致的方式;

       c) 活塞清洁可用双蒸水(或先用异丙醇冲洗再用双蒸水洗净),晾干。尤其是移取过挥发性、腐蚀性溶液后,应清洗晾干,以免挥发性气体长时间吸附于活塞表面,腐蚀、损坏移液器。(一般活塞的清洁涉及到补充涂抹专用的密封油脂)

           注意:移液器主体密封部分,大多是免维护的,不能轻易拆卸。

3. 定期检查

    ● 绝大部分移液器不准是由于移液器漏气造成

    ● 造成移液器漏气的原因:

       a) 吸头是否匹配?不同量程的移液器应匹配相应的吸头;通常应选择同一厂家的移液器和吸头,有的实验室的移液器是进口的,但吸头是国产的,需要注意。

       b)吸头的质量是否合格?选择正规厂家生产的吸头。

       c)装吸头是否上紧?装吸头时,切勿敲击,应将套柄下压并小幅旋转。

       d)移液器自身气密性是否良好?

   ● 移液器气密性检测方法:

      (1). 简单目测法检测

           a) 量程200μl及以下的移液器,将吸头浸入液面1-2毫米,静待20秒,观察吸头内部液面是否下降,如果下降了,就说明移液器出现了漏气的情况;

           b) 1000μl及以上的移液器,将吸头朝下悬垂20秒,观察是否有液体下滴,如果有,说明移液器也出现了漏气的情况。

      (2). 专业压力泵检测,由供应商使用专业设备进行检测

4. 定期校准

       移液器校准的评判标准有准确性和重复性两项。准确性是指测定值与真实值(设定值)符合的程度,也就是测量值与真实值的差距大小。重复性是指单次测定值与平均值符合的程度。
 

A:准确性差、 重复性差

B. 准确性差、重复性好

C. 准确性好、重复性好


我们可以让移液器厂家或具有资质的第三方检定机构进行检验和校准。


对于使用者,平时可以如何判断移液器是否准确呢?此处附上《移液器检定规程》(JJG 646-2006)[A1] 供大家参阅、进行自检


我们可以用移液器移取一定体积的去气双蒸水,在适宜的电子天平上进行称量。但由于环境、场地和设备的限制,一般只能对100μl及以上量程的移液器进行简单的自检。


★Tips: 不同规格的吸头上,会有刻度圈,代表不同的体积,可以此作为移液是否准确的简单判断。


那么移液器的使用有哪些需要注意的细节呢?

请关注下期内容:你的“枪”,你真的懂他吗?(下篇)

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