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ELISA操作中常见问题,干货快收藏!

作者:联科生物    发布日期:2020-03-30 09:00


 

cool  师弟:师兄师姐总结的干货,ELISA操作中遇到大问题全在这里了!
devil  师妹:哈哈,有了这份笔记,再也不用为了实验问题拍师兄师姐马屁了。


Q1:我的样本如何处理、收集、保存?有没有建议?

1.细胞培养上清

细胞培养液在2500rpm/min 离心20分钟后,收集上清即刻检测, 或者分装,-20℃贮存。避免反复冻融。

2.血清样本

分离管分离血清。在 1000 g 离心之前,使血样凝集 30 分钟。吸取血清样本之后即刻检测,或者分装,-20℃贮存。避免反复冻融。

3. 血浆样本

EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝收集血浆样本。在血样收集 30分钟内离心收集样本。即刻检测,或者分装,-20℃贮存。避免反复冻融。

注意:不要使用严重溶血或高血脂的样本。所有样本收集后,应及时分装并贮存于-20℃。如果在 24 小时内检测,样本可以存放在 2 - 8℃。避免样本的反复冻融。在分析前,冷冻样本应该缓慢的恢复至室温,轻柔地混匀。检测前,样本中可见的沉淀必须去除。


Q2:样本反复冻融, 对ELISA检测的影响有多大?

答:样本反复冻融对蛋白影响非常大,易导致蛋白降解;一般来说血清/血浆(蛋白含量丰富)样本冻融1-2次,影响不大;但是其他样本类型,比如细胞上清/肺泡灌洗液,冻融1-2次后,蛋白降解严重,不适合再用于ELISA。


Q3:ELISA实验已设阴性对照,还需空白对照吗?

答:空白对照和阴性对照有区别的。空白对照,仅用稀释液代替检测样本,用以观察最终反应的显色“本底”,并用于酶标仪消除、扣除“本底”,即以本底为“零’,读取阳性、阴性对照孔和样本孔的吸光值。阴性对照,是本实验检测与待检物有同源性和同质性,又不含有待检物质,并能客观比较和鉴别处理因素之间的差异。

 
laugh  师姐:保留一点下期再总结吧。
wink  师兄:大事不好,这个干货太厉害了,透漏的太多了。
 


 

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