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转GFP细胞增殖的示踪的工具

作者:eBioscience官网    发布日期:2010-04-27 05:00

细胞增殖的示踪的工具
 
产品介绍
产品编号
产品名称
规格
85-65-0840 
Cell Proliferation Dye eFluor® 670
1 盒(4 x 500 ug)


Cell Proliferation Dye eFluor® 670 应用于转GFP细胞增殖检测的荧光染料,分子量是792.6, 最大荧光激发波长是647 nm,发射波长是670,可以使用跟APC或Alexa Fluor® 647一致的滤片。Cell Proliferation Dye eFluor® 670标记细胞的荧光非常均匀和稳定,每分裂一次子代细胞的荧光会减弱一半,这样通过流式细胞仪检测就可以检测出没有分裂的细胞,分裂一次的细胞(1/2的荧光强度),分离两次的细胞(1/4的荧光强度),分裂三次的细胞(1/8的荧光强度)以及类似的其它分裂次数的细胞。Fluor® 670可以检测分裂多达6次的细胞增殖,也可以用于标记细胞的长期示踪。
优势:

►  能够与FITC或GFP联用

►  检测分裂多达6次的细胞增殖

►  广泛用于体内和体外实验

►  与荧光素PE无需补偿调整

图1. 采用Cell Proliferation Dye eFluor® 670通过流式细胞仪检测
获得的检测结果如右图。小鼠脾脏细胞加入5 µM Cell Proliferation
Dye eFluor® 670荧光染料。蓝色曲线代表培养0天,紫色曲线代表
培养三天。

Cell Proliferation Dye eFluor® 670标记实验操作步骤:

加入126 µl 无水DMSO重悬Cell Proliferation Dye eFluor® 670冻干粉,储存浓度为5 mM。避光储存于-20度,保持干燥。避免反复冻融。

1. 制备单细胞悬液,细胞浓度为106-107/ml之间。

2. 加入2 ml PBS离心洗涤两次。

3. 用PBS重悬细胞,细胞终浓度达到初始细胞浓度的两倍。当细胞总数少于5x106时,加入大于0.5 ml的PBS。

4. 用PBS稀释Cell Proliferation Dye eFluor® 670储存液,浓度达到10 µM。PBS需提前预热到室温。

5. 按1:1的比例混合细胞悬液,37度避光孵育10分钟。推荐使用5 µM浓度的Cell Proliferation Dye eFluor® 670作为标记细胞的起始浓度。高于10 µM 的染料浓度将阻碍细胞的增殖并且降低标记细胞的活性。

6. 加入4-5倍体积的预冷的完全培养基(包含10%血清)冰上孵育5分钟,用于中止荧光素标记。

7. 用完全培养基洗涤3次。

8. 按个人需求培养或转入体内。

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