QuantiGene FlowRNA新型原位杂交技术

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作者:联科生物 发布日期:2016-08-08 15:30

QuantiGene FlowRNA新型原位杂交技术
FlowRNA是一种新型的原位杂交技术,借助流式细胞仪可实现单细胞水平最多三个RNA转录本同时检测。产品结合专利的寡聚核苷酸探针与Branched DNA( bDNA)信号放大技术来准确检测单个细胞内的基因表达。此外,还兼容标准流式抗体染色,可同时检测同一细胞的表面标志物。RNA表达与蛋白质检测相结合可以实现同时对复杂细胞群的两种水平的分析。与芯片和测序提供的大量基因表达数据相比,QuantiGene FlowRNA 可分析特定细胞群的独特基因表达或评估细胞亚群的动力学特性从而确定转录上调与蛋白表达之间的关系。从独特的视角来解答原本在细胞免疫反应或癌症治疗中无法回答的问题。
特点
■ 单细胞水平的多重基因表达,同时检测单细胞中三种RNA转录本

■ 分子水平的RNA检测灵敏度

■ 兼容细胞表面、胞内、核内蛋白质的抗体染色,RNA 检测和细胞分群同时实现

■ 可检测多种类型的样本

■ 标准流式细胞仪进行数据分析

■ 已有超过4000种靶标的QuantiGene RNA ISH探针

■ 定制及合成探针组,从序列提交到探针合成最多需5天

■ 适用无法获得有效抗体的病毒RNA或蛋白检测
检测原理
QuantiGene FlowRNA基于专利的寡核苷酸探针和bDNA信号放大技术。典型的靶向特异探针组包含20对能与目标RNA杂交的寡核苷酸探针。通过一组相邻的寡核苷酸探针对与目标RNA的特异性杂交,从而放大检测信号。检测结果背景值低、特异性好并且信噪比高。 并可同时利用三种染料信号从而能够实现单细胞水平最多三个RNA目标的同时检测。工作流程(图1)包括四个步骤:样品制备、靶标杂交、bDNA技术的信号放大以及检测。版面有限,图中仅显示了两个RNA靶标(橙色和黄色),且每个目标只显示了20对寡核苷酸中的三对。

探针类型:
目前提供三种荧光标记的探针:Alexa Fluor 488,Alexa Fluor 647,Alexa Fluor 750

探针特异性验证
寡聚核苷酸探针对的使用实现了bDNA技术的高度靶标特异性,只有在两个相邻的目标寡聚核苷酸探针(左侧寡聚核苷酸探针和右侧寡聚核苷酸探针)与特异靶标同时结合时才能实现信号放大(图3A)。为了验证分析特异性,分别使用人GAPDH的左侧寡聚核苷酸探针和右侧寡聚核苷酸探针检测人U937细胞,并与完整的探针组进行比较(图3B和3C)。

只有完整的探针组才能检测到强信号,这与GAPDH在U937细胞中的高表达相关。相比之下,与“无探针”对照相比,单独使用左侧寡聚核苷酸探针或右侧寡聚核苷酸探针均未检测到信号。此外,使用完整探针组的阴性对照(革兰氏阳性菌枯草芽孢杆菌中的DapB基因)也没有产生非特异性的信号。

图3:QuantiGene FlowRNA 试剂特异性证明。如图3A所示,探针对的设计包含左侧和右侧寡核苷酸探针以及信号预放大探针、信号放大探针和荧光标记探针。U937细胞中GAPDH RNA表达的直方图如图B所示。使用平均荧光强度(MFI),对不同探针组的GAPDH信号进行定量(图3C)

关注领域
■ 癌症研究

■ 传染性疾病

■ 免疫学

■ 干细胞研究

■ 毒理学

■ 标志物验证

■ 非编码RNA及RNA 病毒的分析

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