很多流式实验异常,有时并非抗体或仪器问题,而是辅助试剂使用不当。小科将介绍六大流式必备辅助试剂的功能与优势,帮助科研新手快速掌握实验要点,稳定实验结果。
做流式细胞实验,大家往往重点关注抗体选型、荧光配色和仪器参数,却很容易忽略辅助试剂的价值。
实际上,分群模糊、碎片过多、背景偏高、胞内无信号、结果重复性差等常见问题,大多出在前处理、破膜、封闭等辅助步骤。辅助试剂是流式实验顺利开展的重要保障,也是数据稳定的关键。
下面为大家精简梳理流式实验六大核心辅助试剂,新手也能快速看懂、直接用上。
一、红细胞裂解液|血样、骨髓样本必用
血液、骨髓样本含有大量红细胞,会遮挡目标细胞、产生碎片,严重影响白细胞检测结果。
- 原理:利用氯化铵低渗原理裂解红细胞,同时添加稳定剂保护白细胞完好,不损伤目的细胞。
- 优势:裂解充分、操作简单、细胞碎片少,可分出白细胞群,分群干净均匀。
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FCM Lysing Solution(Fixative Free) 10X 红细胞 裂解液 (不含固定剂)
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Lysing Solution For FACS 10X 红细胞裂解液 (适用于BD机器)
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二、固定破膜剂|胞内染色必备试剂
细胞膜会阻挡荧光抗体进入细胞内部,无法检测胞内蛋白与细胞因子,固定破膜是胞内实验的核心步骤。
- 作用:固定细胞形态,同时温和打通细胞膜,让抗体顺利进入胞内结合靶标。
- 优势:细胞分群完整、不易破碎,简化实验流程,有效提升实验特异性与重复性。
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Fix & Perm Kit固定破膜剂
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FoxP3/Transcription Factor Staining Buffer Kit
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三、刺激阻断剂|胞内细胞因子检测刚需
正常状态下T细胞因子表达极低,无法直接检测,必须通过“刺激+阻断”才能检出有效信号。
- 实验逻辑:使用PMA+离子霉素刺激细胞活化,提升细胞因子表达;再通过BFA、莫能霉素阻断高尔基体分泌,将细胞因子截留于胞内,保证流式可正常检测,通常检测辅助性T细胞实验用得较多。
- 优势:浓缩液剂型,直接按比例添加,无需计算、无需分装,低温稳定,使用便捷。
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PMA/Ionomycin Mixture(250X)佛波酯/离子霉素混合物
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- 刺激阻断剂
BFA/Monensin Mixture(250X) 布雷非德菌素A/莫能霉素混合物
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四、流式染色缓冲液|全程通用基础试剂
贯穿细胞重悬、样本洗涤全流程,是所有流式染色实验的基础试剂。
- 作用:含BSA成分,可有效降低抗体非特异性结合,减少背景噪音和假阳性问题。
- 优势:即用型、适配性强,适用于绝大多数表面染色与胞内染色实验,性价比高。
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Flow Cytometry Staining Buffer流式染色缓冲液
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五、4%多聚甲醛|细胞、组织样本固定液
多用于细胞和组织样本的后期固定与保存,替代复杂的人工配制流程。
- 优势:成品PBS溶液开盖即用,无需自行配制,可直接用于流式染色后的样本固定。
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六、Fc封闭试剂|新手最容易遗漏的步骤
B细胞、NK细胞、巨噬细胞等表面表达Fc受体,容易非特异性结合抗体,造成背景升高、假阳性偏高,小鼠流式实验尤为关键。
- 作用:封闭细胞表面Fc受体,杜绝非特异性吸附,还原真实染色信号。
- 优势:封闭效果稳定、质控严格,适配不同实验样本量。
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