流式核内蛋白染色步骤

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使用MultiSciences FoxP3/Transcription Factor Staining Buffer Kit (#IC001)染色步骤如下:

  1. 染表面抗体,按说明书条件孵育全血样本孵育抗体后加入不含固定剂的溶血素(按厂家说明操作),溶血完毕
  2. 加入2ml流式染色缓冲液,300-400g离心5分钟,弃去上清
  3. 用 3 倍体积的固定/破膜稀释液(#ICD01)稀释固定/破膜浓缩液(#ICC01)制成固定/破膜工作液,注意要新鲜配制,每个样本的用量为 1ml
  4. 每管加入1ml固定/破膜工作液(1:3稀释好)涡旋振荡混匀,室温避光孵育30-60分钟
  5. 将10×破膜缓冲液(#ICB01)用去离子水 1:9 稀释,制成1×破膜缓冲液(每个样本的用量为 8.5ml)
  6. 无需洗涤,直接加入2ml 1×破膜缓冲液(1:9稀释好)300-400g 离心5分钟,弃去上清(可选)重复洗涤一次
  7. 用100 ul 1×破膜缓冲液重悬细胞(可选)加入2 ul胞内抗体来源的血清阻断,室温避光孵育15分钟
  8. 无需洗涤,体系加入适量的FoxP3抗体或其他核内抗体或等量的同型对照(抗体用量和孵育条件详见抗体说明书)振荡混匀,室温避光孵育至少30分钟
  9. 每管加入2ml 1×破膜缓冲液,300-400g离心5分钟,弃上清(可选)重复洗涤一次
  10. 用 500ul 流式染色缓冲液重悬细胞,上机检测并分析如不能立即检测,用 0.5ml 0.1~4%多聚甲醛重悬,4℃避光保存24小时内上机分析

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