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作者：QIAGEN官网 发布日期：2015-05-02 08:00
exosome是直径约为30-150nm的小囊泡，在30年前被人们所发现。exosome天然存在于所有体液中，包括血液、唾液、尿液和母乳，且其蛋白、RNA和脂肪成分特异，早期的研究认为，exosome执行蛋白运输功能，特异靶定受体细胞，交换蛋白和脂类或引发下游信号事件。直到2007年，研究人员发现exosome也运输核酸，参与细胞间通讯。至此，这种小囊泡才被人重视，并成为热门的研究对象。细胞外微泡， 运载RNA（包括mRNA、miRNA、lncRNA）、DNA及蛋白质，为细胞间信号交流起着重要作用。
QIAGEN exoRNeasy Serum/Plasma Kit改进了传统的超速离心微泡分离方法，能够在20分钟内快速纯化得到细胞外囊泡。该试剂盒采用Exosome Diagnostics, Inc.公司的技术，通过离心柱和特制缓冲液，从多达4 ml的预过滤血浆中分离exosomes。之后使用QIAGEN miRNeasy技术分离总RNA。整个实验流程，从血清/血浆样本到RNA产物，只需1小时。
性能优势：
exoRNeasy纯化exosomes和其他细胞外微泡与超速离心法相比，不仅速度更快，并且产物纯度更高。扫描电镜显示，虽然这两种纯化技术都能够纯化预期大小的完整的囊泡，但超速离心法的产物还含有很多不符合预期的更小、或其他形状的细胞结构。
 通过RT-qPCR实验对exoRNeasy纯化的RNA产物和exoEasy分离柱流出液进行分析，结果显示，exoRNeasy的产物包括血浆中所有mRNA，包括细胞外囊泡的miRNA，且不含细胞。
操作流程 ：
从细胞外微泡分离RNA的完整实验包括两步：纯化exosomes和分离RNA。
在exosomes纯化步骤，预过滤的血浆（不包含大于0.8 μM的微粒）与Buffer XBP混合，加至exoEasay亲和性膜离心柱上，结合到柱上。使用Buffer XWP洗涤结合在膜上的囊泡，之后使用QIAzol裂解。
在RNA分离步骤，在QIAzol洗脱液中加入氯仿，回收水相，将其与乙醇混合。包括miRNA在内的总RNA结合到离心柱上，洗涤三次后洗脱。
产品信息 ：囊泡RNA研究完整解决方案：
| 研究方案 |
产品 |
货号 |
目录价 |
| 纯化来自血清/血浆样本中exosome中的RNA(含miRNA) |
exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit (50) |
77064 |
26420 |
| exoRNeasy Serum/Plasma Midi Kit (50) |
77044 |
10560 |
| exoRNeasy Serum/Plasma Starter Kit (20) |
77023 |
5790 |
| 检测exosome中miRNA产品套装 |
miScript II RT Kit (12) |
218160 |
1450 |
| miScript Primer Assay (100) |
218300 |
1060 |
| miScript SYBR Green PCR Kit (200) |
218073 |
5380 |
| miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control |
219610 |
560 |
| 检测exosome中lncRNA产品套装 |
RT² First Strand Kit (12) |
330401 |
2640 |
| RT² lncRNA qPCR Assay (200) |
330701 |
1590 |
| QuantiNova SYBR Green PCR Kit (500) |
208054 |
2880 |
| 检测exosome中mRNA产品套装 |
RT² First Strand Kit (12) |
330401 |
2640 |
| QuantiTect® Primer Assay (200) |
249900 |
900 |
| QuantiNova SYBR Green PCR Kit (500) |
208054 |
2880 |
规格解释 ：
| 产品货号 |
产品名称 |
规格 |
| Y5-77023 |
exoRNeasy Serum/Plasma Starter Kit (20) |
10 次Maxi大抽+ 10 次Midi中抽（样本囊泡RNA量不确定时，建议选择尝试确定初始样本） |
| Y5-77044 |
exoRNeasy Serum/Plasma Midi Kit(50) |
50次；一次最大抽提1ml血浆/血清 |
| Y5-77064 |
exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit (50) |
50次；一次最大抽提4ml血浆/血清 |
|
