QIAGEN-囊泡exosome RNA的完美解决方案

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作者:QIAGEN官网 发布日期:2015-05-02 08:00

QIAGEN-囊泡exosome RNA的完美解决方案
exosome是直径约为30-150nm的小囊泡,在30年前被人们所发现。exosome天然存在于所有体液中,包括血液、唾液、尿液和母乳,且其蛋白、RNA和脂肪成分特异,早期的研究认为,exosome执行蛋白运输功能,特异靶定受体细胞,交换蛋白和脂类或引发下游信号事件。直到2007年,研究人员发现exosome也运输核酸,参与细胞间通讯。至此,这种小囊泡才被人重视,并成为热门的研究对象。细胞外微泡, 运载RNA(包括mRNA、miRNA、lncRNA)、DNA及蛋白质,为细胞间信号交流起着重要作用。

QIAGEN exoRNeasy Serum/Plasma Kit改进了传统的超速离心微泡分离方法,能够在20分钟内快速纯化得到细胞外囊泡。该试剂盒采用Exosome Diagnostics, Inc.公司的技术,通过离心柱和特制缓冲液,从多达4 ml的预过滤血浆中分离exosomes。之后使用QIAGEN miRNeasy技术分离总RNA。整个实验流程,从血清/血浆样本到RNA产物,只需1小时。
性能优势:
exoRNeasy纯化exosomes和其他细胞外微泡与超速离心法相比,不仅速度更快,并且产物纯度更高。扫描电镜显示,虽然这两种纯化技术都能够纯化预期大小的完整的囊泡,但超速离心法的产物还含有很多不符合预期的更小、或其他形状的细胞结构。

通过RT-qPCR实验对exoRNeasy纯化的RNA产物和exoEasy分离柱流出液进行分析,结果显示,exoRNeasy的产物包括血浆中所有mRNA,包括细胞外囊泡的miRNA,且不含细胞。
操作流程 :
从细胞外微泡分离RNA的完整实验包括两步:纯化exosomes和分离RNA。

在exosomes纯化步骤,预过滤的血浆(不包含大于0.8 μM的微粒)与Buffer XBP混合,加至exoEasay亲和性膜离心柱上,结合到柱上。使用Buffer XWP洗涤结合在膜上的囊泡,之后使用QIAzol裂解。

在RNA分离步骤,在QIAzol洗脱液中加入氯仿,回收水相,将其与乙醇混合。包括miRNA在内的总RNA结合到离心柱上,洗涤三次后洗脱。

产品信息 :囊泡RNA研究完整解决方案:

研究方案 产品 货号 目录价
纯化来自血清/血浆样本中exosome中的RNA(含miRNA) exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit (50) 77064 26420
exoRNeasy Serum/Plasma Midi Kit (50) 77044 10560
exoRNeasy Serum/Plasma Starter Kit (20) 77023 5790
检测exosome中miRNA产品套装 miScript II RT Kit (12) 218160 1450
miScript Primer Assay (100) 218300 1060
miScript SYBR Green PCR Kit (200) 218073 5380
miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control 219610 560
检测exosome中lncRNA产品套装 RT² First Strand Kit (12) 330401 2640
RT² lncRNA qPCR Assay (200) 330701 1590
QuantiNova SYBR Green PCR Kit (500) 208054 2880
检测exosome中mRNA产品套装 RT² First Strand Kit (12) 330401 2640
QuantiTect® Primer Assay (200) 249900 900
QuantiNova SYBR Green PCR Kit (500) 208054 2880

规格解释 :

产品货号 产品名称 规格
Y5-77023 exoRNeasy Serum/Plasma Starter Kit (20) 10 次Maxi大抽+ 10 次Midi中抽(样本囊泡RNA量不确定时,建议选择尝试确定初始样本)
Y5-77044 exoRNeasy Serum/Plasma Midi Kit(50) 50次;一次最大抽提1ml血浆/血清
Y5-77064 exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit (50) 50次;一次最大抽提4ml血浆/血清