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ELISA中的Streptavidin-HRP是什么?

作者:池博专刊    发布日期:2020-12-02 13:00


Streptavidin,链霉亲和素。来自于链霉菌Streptomyces avicllrdi的亲和素。非特异性结合远比亲和素低。在ELISA试剂盒中,用于与检测抗体上结合的生物素相结合。


HRP:Horseradish Peroxidase:辣根过氧化物酶。辣根:一种植物。英文名Horseradish,又称马萝卜。属双子叶植物纲、白花菜目、十字花科、辣根属多年生直立草本。全体无毛。根肉质肥大,纺锤形,白色,下部分枝。茎粗壮,表面有纵沟,多分枝。原产欧洲东部和土耳其,已有2000多年的栽培历史。中国的青岛、上海郊区栽培较早,其他城郊或蔬菜加工基地有少量栽培(百度百科)
 

图1. 辣根(图片来源:百度百科)
 

早在1810年,发现辣根浸出液可染蓝愈创树脂。1822年,发现动植物体内有某种物质,能使双氧水氧化一些有机物。1898年,Linossier把它命名为过氧化物酶(辣根过氧化物酶及其同工酶,《生命的化学》,1992,12(3):30)。


根据国际酶委员会(International Commission on Enzymes),HRP的系统命名是过氧化氢氧化还原酶(donor:hydrogen peroxide oxidoreductase; EC 1.11.1.7) 。有许多同工酶。在拟南芥中过氧化物酶大概有70多个。HRP C研究的最为清楚。由308个氨基酸组成,有4对半胱氨酸形成的二硫键,有99位Asp和123位Arg形成的盐桥,有9个潜在的糖基化位点,至少有8个位点确实发生糖基化修饰,有两个金属中心:正铁原卟啉(血红素)和两个钙原子。
 

图2. 图示HRP中的铁卟啉
 
图3. 推测HRP的三维结构


HRP催化的反应如下:

 

为什么用HRP?因为HRP灵敏,稳定,比活性高,分子量小,纯酶容易制备。酶溶液在pH 5-10,室温环境下也能长期保存。对水透析,也不失活。酶的硫酸铵溶液储存在4度一年不会失活。粉剂置于低温干燥处,长期不失活。


你知道HRP除了在ELISA中催化TMB产生蓝色产物,还有哪些使用场景吗?它可以在Western、EMSA、Southern或Northern等检测时催化ECL类试剂(如ECL、BeyoECL等)产生化学发光。也可以在免疫组化、免疫细胞化学或Western blot检测时催化DAB产生棕色沉淀。酶标二抗,那个酶绝大多数就是HRP。

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