多色分析荧光素首选----Alexa Fluor 荧光染料
? 亮度(Brightness) --- 高
? 光稳定性(Photostability) --- 强
? pH --- 不敏感
早期凋亡检测--- Annexin V/PI存在的问题
? 贴壁细胞–胰酶消化破坏Annexin V结合位点
? 需高钙离子的结合缓冲液
? 需洗涤步骤
解决的方法YO-PRO-1/PI
? 特别适合贴壁细胞检测–与Annexin V/PI检测相关性极
? 无需特殊的结合缓冲液
? 无洗涤步骤
DNA含量分析新宠DyeCycle——标本直接染色！30分钟即可上机检测！
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Vybrant DyeCycle |
DRAQ5 |
PI(碘化丙啶) |
| 生产商 |
Molecular Probes |
Biostatus |
多家 |
| 膜通透性 |
通透，染色活细胞 |
通透 |
不通透 |
| 细胞毒 |
无毒性，可分选、再培养 |
毒性大 |
细胞已死亡 |
| 激光器 |
488nm |
633/635nm |
488nm |
| 检测通道 |
FL1或FL2 |
FL3(FC500)， FL4(BD) |
FL2和FL3 |
| 操作 |
简单、快速 |
简单、快速 |
需固定，复杂，耗时长 |
| 价格 |
适中 |
昂贵 |
便宜或适中 |
活细胞/死亡细胞鉴别——SYTOX替代PI ，用于多色分析！
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LIVE/DEAD Fixable Dead Cell Stain Kits |
SYTOX |
PI(碘化丙啶) |
7-AAD |
| 生产商 |
Molecular Probes |
Molecular Probes |
多家 |
多家 |
| 染色后固定 |
可以，能延迟分析 |
不能 |
不能 |
不能 |
| 生物危害性 |
无 |
有 |
有 |
有 |
| 检测通道 |
FL1或FL3 |
FL1,FL2, FL3(FC500)， FL4(BD) |
FL2和FL3 |
FL3(FC500)， FL4(BD) |
| 激光器 |
UV, 405nm 或488nm |
405nm, 488nm, 532nm 或633nm |
488nm |
633nm |
| 存在的问题 |
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多通道检测, 不适合多色分析 |
分群不好 |
CFSE细胞示踪技术
原理：
CFSE存留于细胞整个发育和有丝分裂过程中，可用于体内(in vivo)和体外(in vitro)的细胞示踪。
特点：
? 目前应用范围最广的细胞示踪试剂
? 为流式细胞术检测调试
? 示踪时间长：
标记有CFSE的淋巴细胞注射入小鼠后，8周之内均可检测到CFSE[1]；
小鼠活的肝细胞标记CFSE，肝内移植20天后仍可检测到CFSE[2]
[1] J Immnol Methods. 1990, 133: 87
[2 ] Transplant Proc. 1992, 24: 2820
细胞增殖研究 CFSE Cell Proliferation Kit
? 细胞分裂次数
? 多参数分析-同时标记其它表面或内部分子，以分析各细胞分裂相抗原的表达情况。
Ca2+测定
| 产品名称 |
激发波长(nm) |
发射波长(nm) |
Ca2+升高时的发射变化 |
备 注 |
| Ratiometric dyes （比率法测定染料） |
| Indo-1 |
UV |
401/475 |
比率改变 |
经典的Ca2+染料，需UV激发 |
| Fluo-3/Fura Red |
488 |
530/660 |
比率改变 |
|
| Non-Ratiometric dyes（非比率法测定染料） |
| Fluo-3 |
488 |
526 |
升高 |
经典的Ca2+染料，结合Ca2+后荧光强度高强。 |
| Fluo-4 |
488 |
516 |
升高 |
Fluo-3的类似物，2个氯基团被氟取代，488nm激发增强。 |
| Calcium Green-1 |
488 |
530 |
升高 |
结构与Fluo-3相似，低Ca2+浓度时荧光更强，适于检测基准水平和静止细胞。 |
| Orange Green 488BAPTA-1 |
488 |
523 |
升高 |
Calcium Green的类似物，氯基团被氟取代，荧光强度高于Fluo-3和Calcium Green。 |
| Fura Red |
488 |
597 |
降低 |
Stroke’s位移大，将组织和生物液体中自发荧光和色素的干扰降至最低。 |
氧化爆发(Oxidative Burst)
吞噬细胞(单核和中性粒细胞)在进行氧依赖性杀菌过程中，会激活细胞膜上的还原型辅酶I (NADH氧化酶)和还原型辅酶II (NADPH氧化酶) ，使分子氧化，生成大量的活性氧簇 (reactive oxygen species，ROS)，包括过氧化氢和氧离子自由基等，这些物质具有很强的氧化作用和细胞毒作用，能有效地杀伤病原微生物。
HDCFA： (dichlorodihydrofluorescein diacetate) (二氯双氢荧光素二乙酸酯)
? 需细胞内酯酶酯解，适合检测粒细胞
Fc OxyBurst：
? 无需细胞内酯酶酯解，
? 适合检测单核细胞和粒细胞
HDCFA：? 受ROS从吞噬体向胞质弥散速度的限制
Fc OxyBurst：? 直接检测内吞及吞噬体内的氧化爆发
BacLightTM Bacterial Stains 细菌死活鉴别
? 非核酸标记的荧光试剂，流式细胞术检测。
? 快速：15min
? 免洗
? 多参数分析：核酸探针、Lectin标记物和标记抗体等
BacLightTM RedoxSensorTM Green 细菌活力检测
原理：? RedoxSensorTM Green试剂，在细菌还原酶(Reductase)的作用下形成稳定的绿色荧光信号，是反映细菌活力的敏感指标。
应用：? 细菌药敏试验
? 发酵罐中细菌的活力
特点：? 快速：10min
? 含PI(碘化丙啶)，用于鉴别死细胞
? 含G+和G-细菌的阴性质控试剂CCCP (碳酰氰基-对-氯苯腙)和叠氮钠
BacLightTM Bacterial Membrane Potential 细菌膜电位检测
? 荧光染料 — DiOC2(3)，绿色
? 膜电位正常(健康细菌) -- DiOC2(3)聚集，荧光红移
? 膜电位变化 – 红/绿荧光比率
FluoReporter® LacZ Flow Cytometry Kit 报告基因检测
传统的X-Gal比色检测法敏感度低，常需要大量细胞提取物以获得足够强的信号
FluoReporter® LacZ 流式试剂盒
1) 专利的低渗技术负载FDG底物
2) 非常敏感地检测单细胞水平的β-半乳糖苷酶活性
3) 可分选和克隆β-半乳糖苷酶阳性的细胞
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