功能蛋白的表达水平内参抗体

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作者:联科生物 发布日期:2014-02-14 14:00

功能蛋白的表达水平内参抗体
内参是内在参照,在各组织和细胞中表达相对恒定,在检测某些功能蛋白的表达水平变化时用它做参照物,可以校正蛋白定量、上样过程中存在的实验误差,保证实验结果的准确性。下面对这些抗体进行简要介绍:

Actin :即肌动蛋白,是细胞的一种重要骨架蛋白。Actin大致可分为六种,其中四种是不同肌肉组织特异性的,其余两种广泛分布于各种组织中,包括 β-actin和γ-non-muscle actin。β-actin作为内参是得到了公认的,这是针对大多数组织和细胞来说的,它广泛分布于细胞浆内,表达量非常丰富,其含量占所有细胞总蛋白的50%。但是在一些少量特殊的情况下,如脂肪组织或细胞内,β-Actin的表达量就很少。β-actin由375个氨基酸组成,分子量大小为42-43kDa左右。

GAPDH:(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa。 GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。

Tubulin:即微管蛋白,是细胞的一种骨架蛋白。Tubulin分为α、β、γ、δ、ε等多种tubulin,其中α-Tubulin和β-Tubulin可以形成异源二聚体,是形成微管的最主要的两种Tubulin。α-tubulin和β-tubulin分子量分别为55kDa和50kDa,其实际检测条带均在55kDa左右。作为内参,β-tubulin的蛋白水平通常不会发生改变,因此被广泛用于Western Blotting时上样量是否一致的参照,也常被用于免疫染色观察细胞的微管结构。

如何选择内参:

(1) 考虑目的蛋白的大小,我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分 子量最好相差5KD以上;

(2) 不同的组织来源的样本在选择内参时还有一定的区别。比如某些细胞中,由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高,不适合做内参;

(3) 内参抗体可检测的种属类型越多,在使用过程中的选择余地就越大;而小鼠源的单克隆抗体一般在特异性、稳定性以及效价都要优于多克隆抗体,联科品牌的内参抗体均为小鼠单抗;

(4) 抗体的效价也是考察该抗体性价比的重要方面,也即相当于实际应用时的稀释比率.联科品牌的内参稀释比均达到1:1000-1:10000.。

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