可固定的死活细胞鉴定染料 eBoscience

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作者:联科生物 发布日期:2013-11-21 14:00

为什么要进行死活细胞鉴定?

⇒ 死细胞的非特异性染色

⇒ 细胞的背景增高,影响检测的灵敏度例

⇒ 死细胞染色影响正确的结果比例

与传统染料PI、7-AAD相比有何优势?

⇒ 适用于胞内染色的死活细胞鉴定—— 固定、破膜以及洗涤步骤不影响Fixable Viability Dye的染色,而PI、7-AAD的染色通常是放在其他抗体孵育完成后进行,不能洗涤即要上机检测;对于胞内抗体的染色,由于经过了固定步骤,经过PI或7-AAD染色后所有的细胞都是阳性,所以他们只适合于胞膜染色的死活细胞鉴定

⇒ Fixable Viability Dye的光谱多样,适合各种染色组合的搭配

Fixable Viability Dye eFluor® 450
Fixable Viability Dye eFluor® 506
Fixable Viability Dye eFluor® 660
Fixable Viability Dye eFluor® 780

eBioscience Fixable Viability Dye使用原理

—— 氨基反应性染料,与细胞表面或者内部的蛋白不可逆的结合

未标记的空白细胞 无荧光
标记后的活细胞只能染上表面蛋白 中等强度荧光
标记后的死细胞表面和内部的蛋白都染上 高强度荧光

实验步骤:

1、 将Fixable Viability Dye先平衡至室温;

2、 用不含叠氮钠、血清及蛋白的PBS将细胞洗两遍;

3、 用1ml PBS(不含叠氮钠、血清及蛋白)重悬细胞,至1-10^6/ml的浓度。

4、 加入1ul Fixable Viability Dye,立即涡旋混匀;

5、 2-8℃ 避光孵育30分钟;

6、 用PBS或者流式染色缓冲液洗1~2遍;

7、 固定、破膜进行胞内染色

Note:胞膜染色在染料染色前或后进行都可。

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实验结果示例

普通染色
区分死活细胞后只分析活细胞