PeproGrow-hESC培养基最新应用-牛精原干细胞

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作者:PeproTech官网 发布日期:2016-05-25 07:00

精原干细胞 (spermatogonial stem cells,SSCs)是一群生活在睾丸特殊环境中并能自我更新和具有多向分化潜能的细胞,是精子发生的基础。目前现有的体外培养方案尚未完全成熟。

西北农林科技大学的华进联课题组最近比对了六种商品化的无血清细胞培养基,及不同的细胞外基质(层粘连蛋白、明胶、Matrigel)包被培养器皿,对于牛mGSCs培养的影响,发现用PeproGrow-hESC培养基+BIO(6-bromoindirubin-3-oxime,GSK-3信号的抑制剂)联合培养时,可稳定获得大量mGSCs,且维持经典的mGSCs细胞形态学特征,并表达多能性ES和mGSCs细胞的经典特异性标志物,包括SSEA-1、CD49f、C-MYC、PLZF、GFR-α1、LIN28、NANOG、Oct4及SOX2等。牛mGSCs悬滴培养时可形成胚状体。

而对于细胞外基质,使用层粘连蛋白和Matrigel包被培养器皿时,GSCs的生长及增殖、细胞形态与表型等方面都远远优于明胶(见参考文献中图2)。

维甲酸处理PeproGrow-hESC培养基+BIO培养的牛mGSCs后,细胞呈现典型精子样细胞的形态学特征,并表达其特异性标志物:Stra8、SCP3、DZAL、EMA1及VASA。因而PeproGrow-hESC培养基+BIO可作为优良的牛mGSCs细胞的无血清、无饲养层细胞的培养方案(见参考文献中图5)。

PeproTech提供精原干细胞体外培养所需的所有的生长因子、培养基及小分子试剂,详细相关产品请见下表:

产品名称 货号 使用浓度 厂家
PeproGrow hESC 96-BM-hESC PeproTech
BIO BG-6676296 2.5μM PeproTech-BioGems
Human FGF-basic 96-AF-100-18B 10ng/ml PeproTech
Human GDNF 96-AF-450-10 20ng/ml PeproTech
Human EGF 96-AF-100-15 10ng/ml PeproTech
Human LIF 96-AF-300-05 10ng/ml PeproTech

PeproGrow-hESC是一种无血清、化学成分明确的完全培养基,用于无饲养层维持培养和扩增人胚胎干细胞(hESCs)及诱导多能性干细胞(hiPSCs)。培养过程中需以BD MatrigelTM或重组Vitronectin作为基质对培养器皿进行包被。该培养基专门用于培养人ESCs和iPSCs,使细胞保持未分化的多能性状态(SSEA4+/Oct4+)。流式细胞术显示,仅有不到15%的细胞发生自发性分化。
PeproGrow-hESC的配方中含有FGF2 (碱性成纤维细胞生长因子,FGF-basic)等生长因子,但不含胰岛素 (当前市场上的大多数其他hESC/hiPSC培养基中均含胰岛素)。PeproGrow-hESC由PeproTech与美国Rutgers(罗格斯)大学干细胞培训中心合作研发,包含100mL或500mL的基础培养基和一管单独的生长因子混合物冻干粉。

BIO(6-bromoindirubin-3'-oxime)是GSK-3的特异性抑制剂,是第一个维持人类和小鼠的胚胎干细胞自我更新的药理剂。它作用于GSK-3α/β,IC50为5 nM,比作用于CDK5选择性高16倍以上。BIO作用于人类和小鼠胚胎干细胞,保持其未分化状态,并维持Oct-3/4, Rex-1和Nanog表达。
BIO参与Wnt信号激活,促进哺乳动物心肌细胞增殖。BIO也是pan-JAK抑制剂,作用于TYK2, JAK1, JAK2 和 JAK3,IC50值分别为0.03、1.5、8.0、0.5μM。BIO选择性抑制STAT-3磷酸化,诱导人类黑色素瘤细胞凋亡。
参考文献:Bo Li, Jinlian Hua. Bovine male germline stem-like cells cultured in serum- and feeder-free medium.Cytotechnology.2016;DOI 10.1007/s10616-015-9933-2.