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凋亡细胞检测方法知多少

作者:联科生物    发布日期:2020-06-10 10:00


细胞凋亡(Apoptosis):也称细胞程序性死亡(Programmed Cell Death,PCD),是为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡,在多细胞生物去除不需要的或异常的细胞中起着必要的作用,属于细胞的“自杀”行为。细胞凋亡早中晚期各有特点:



检测细胞凋亡的方法有很多,有根据凋亡细胞固有的形态特征,利用光学显微镜、激光扫描共聚焦显微镜和透射电子显微镜等来观察细胞形态;也有根据细胞凋亡过程中的时相变化检测是否发生凋亡,常见的有Caspase活性检测、Annexin V检测、线粒体膜电位检测、TUNEL检测等。


Caspase活性检测

Caspase 是近年来发现的一组存在于胞质溶胶中的结构上相关的半胱氨酸蛋白酶,它们的一个重要共同点是活性位点都含有半胱氨酸,并特异地断开天冬氨酸残基后的肽键。Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用,其中caspase-3为关键的执行分子,它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原(32KD)的形式存在于胞浆中,在凋亡的早期阶段,它被激活,活化的Caspase-3由两个大亚基(17KD)和两个小亚基(12KD)组成,裂解相应的胞浆胞核底物,最终导致细胞凋亡。可利用Caspase催化相应的底物××—××—pNA,通过酶标仪或分光光度计测定pNA的吸光度,以检测Caspase活性。



Annexin V检测

磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于细胞膜的内侧,但在细胞凋亡的早期,PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素(FITC、PE等)标记,以标记了的Annexin-V作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。


碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin-V与PI匹配使用,就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。


线粒体膜电位检测

线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用,多种细胞凋亡刺激因子均可诱导不同的细胞发生凋亡,而线粒体跨膜电位的下降,被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件,它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体膜电位崩溃,则细胞凋亡不可逆转。


线粒体跨膜电位的存在,使一些亲脂性阳离子荧光染料如Rh123, DiOC6(3), JC-1, TMRM等可结合到线粒体基质,其荧光变化说明线粒体膜电位的变化。

喜树碱(CPT)诱导HL-60细胞凋亡,3小时后用JC-1检测线粒体膜电位的改变。可见,凋亡细胞红色荧光降低。


TUNEL检测

细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现50-200 bp的DNA ladder。TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling)细胞凋亡检测方法可用来检测细胞在凋亡晚期过程中基因组DNA断裂情况。其原理是在基因组DNA断裂时,暴露的3,-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下掺入荧光素标记的 dUTP,从而可以用荧光显微镜或者流式细胞仪检测。


由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被染色。TUNEL实际上是分子生物学与形态学相结合的研究方法,对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色,能准确地反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征,可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞的细胞形态测定,并可检测出极少量的凋亡细胞,因而在细胞凋亡的研究中被广泛采用。


使用 Direct TUNEL Apoptosis Assay Kit 检测经 10 µM 喜树碱 (Camptothecin)处理的 Jurkat 细胞样本。

 

联科生物凋亡检测神器

 
目录号 产品名称 规格型号
70-AP101 Annexin V-FITC/PI apoptosis kit细胞凋亡试剂盒
(适用于除C6以外的流式细胞仪)
30/60/100 T
70-AP104 Annexin V-PE/7-AAD apoptosis kit(细胞凋亡试剂盒) 30/60/100 T
70-AP105 Annexin V-APC/7-AAD apoptosis kit(细胞凋亡试剂盒) 30/60/100 T
70-AP107 Annexin V-APC/PI apoptosis kit(细胞凋亡试剂盒) 30/60/100 T
70-AP108 Annexin V-EGFP/PI apoptosis kit(细胞凋亡试剂盒) 30/60/100 T
70-AP109 Annexin V-EGFP/7-AAD apoptosis kit(细胞凋亡试剂盒) 30/60/100 T
70-AT101 Annexin V-FITC/PI apoptosis kit(细胞凋亡试剂盒-适用贴壁细胞) 30/60/100 T
70-AT104 Annexin V-PE/7-AAD apoptosis kit(细胞凋亡试剂盒-适用贴壁细胞) 30/60/100 T
70-AT105 Annexin V-APC/7-AAD apoptosis kit(细胞凋亡试剂盒-适用贴壁细胞) 30/60/100 T
70-AT107 Annexin V-APC/PI apoptosis kit(细胞凋亡试剂盒-适用贴壁细胞) 30/60/100 T
70-AT108 Annexin V-EGFP/PI apoptosis kit(细胞凋亡试剂盒-适用贴壁细胞) 30/60/100 T
70-AT109 Annexin V-EGFP/7-AAD apoptosis kit(细胞凋亡试剂盒-适用贴壁细胞) 30/60/100 T
70-AP101C Annexin V-FITC/PI apoptosis kit (细胞凋亡试剂盒 C6专用) 30/60/100 T
70-APCC101C Annexin V FITC/PI apoptosis(C6专用) and cell cycle kit(100T and 50T)
(细胞凋亡/周期试剂盒 C6专用)
30/60/100 T
70-APCC101 Annexin V FITC/PI apoptosis and cell cycle kit(60T and 50T)
(细胞凋亡/周期试剂盒)
30/60/100 T
70-APCC104 Annexin V-PE/7-AAD apoptosis and cell cycle kit(100T and 50T)
(细胞凋亡试剂盒-适用贴壁细胞)
30/60/100 T
70-APCC105 Annexin V-APC/7-AAD apoptosis and cell cycle kit(100T and 50T)
(细胞凋亡试剂盒-适用贴壁细胞)
30/60/100 T
70-MJ101 Mitochondria Staining Kit(JC-1)线粒体膜电位检测试剂盒 125 T
70-APO001 Direct TUNEL Apoptosis Assay Kit(细胞凋亡试剂盒) 50 T
70-APC03 Caspase 3 活性检测试剂盒 20/50/100 T
70-APC08 Caspase 8 活性检测试剂盒 20/50/100 T
70-APC09 Caspase 9 活性检测试剂盒 20/50/100 T
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