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作者:联科生物 发布日期:2016-10-12 09:00
底物化学发光ECL是Western blot最常用的显色方法之一,其原理是辣根过氧化物酶在H2O2的作用下,氧化化学发光物鲁米诺(Lumino)并发光,在化学增强剂存在下光强度可以增大1000倍,通过在照相底片上感光就可以检测辣根过氧化物酶的存在。
Fig:ECL发光检测原理示意图
ECL法具有操作简单,灵敏度高,线性范围广等特点,现将该方法使用中最常出现的问题以及解决方法汇总如下:
| 现象 |
原因 |
解决办法 |
| 信号弱或无 |
HRP过高引起底物迅速耗竭 |
稀释一抗/二抗 |
| 抗体-抗原系统敏感性过低 |
提高抗体浓度/蛋白上样量 |
| 转膜不充分/过转 |
优化转膜条件 |
| HRP或底物活性降低 |
测试活性或选用敏感底物 |
| 高背景 |
HRP过高(背景较高) |
稀释一抗/二抗 |
| 封闭时间不足 |
延长封闭时间4度过夜最好 |
| 抗体与封闭液有交叉 |
更换封闭液(如3% BSA的TBST) |
| TBST洗脱不足 |
增加洗脱时间、次数、用量 |
| 曝光时间过长 |
降低曝光时间 |
| 抗原-抗体浓度过高 |
降低抗体浓度或蛋白上样量 |
| 条带内无显影的白点 |
转膜不良(如有气泡在胶-膜之间) |
精细操作 |
| 膜平衡不均/油脂污染 |
按说明书平衡膜/戴手套用平头镊子持膜 |
| 膜与X光片间有气泡 |
显影前去除气泡 |
| 非特异性条带 |
抗体交叉反应 |
稀释一抗/二抗 |
| 散在小圆斑 |
封闭液有杂质颗粒 |
静置牛奶使大颗粒沉淀,仅用上层 |
| 反影(白色条带,黑色背景) |
HRP过高(背景较高) |
稀释一抗/二抗 |
| 显影后膜上条带处变为黄色 |
HRP过高(敏感性太高) |
稀释一抗/二抗 |
联科生物ECL显色试剂盒产品特点:
⇒ 高灵敏度的非放射性检测系统:可检测低至100fg~1pg的抗原,适用于痕量抗原的检测。
⇒ 高分辨率:本底极低,即使长时间曝光,背景仍然极低,远远优于国产与进口同类产品。
⇒ 半衰期长:信号衰减慢,12个小时以上仍可感光X光胶片。
ECL试剂盒产品列表:
| 目录号 |
产品名称 |
规格 |
目录价 |
| P1421 |
Potent ECL Kit |
60ml |
300 |
| P1423 |
Potent ECL kit |
500ml |
2000 |
| P1425 |
Potent ECL kit |
100ml |
480 |
| P142B |
Potent ECL Bulk |
1L |
3600 |
| P142S |
Potent ECL Sample |
10ml |
50 |
| U1421 |
Ultra ECL kit |
60ml |
360 |
| U1423 |
Ultra ECL kit |
500ml |
2400 |
| U1425 |
Ultra ECL kit |
100ml |
560 |
| U142B |
Ultra ECL Bulk |
1L |
4200 |
| U142S |
Ultra ECL sample |
10ml |
60 |
|
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相关产品
| 目录号 |
产品名称 |
规格 |
目录价 |
| DY01 |
定影粉(1L) |
包 |
20 |
| XY01 |
显影粉(1L) |
包 |
20 |
| WB001 |
X射线摄影暗匣(含高速增感屏)127*178mm |
个 |
480 |
| WB002 |
X射线摄影暗匣127*178mm |
个 |
400 |
| WB003 |
RB-400高速增感屏127*178mm |
个 |
180 |
| X1111 |
KODAK X光胶片 |
100张/盒 |
298 |
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