https://www.liankebio.com/article-information_Tech-1161.html
作者：eBioscience官网 发布日期：2014-05-22 10:00
 要用AnnexinV双染法测凋亡，又想同时标记蛋白marker，甚至还有胞内指标，可是PI和7-AAD都不能洗，怎么办？ eBioscience的可固定细胞活力染料Fixable Viability Dye帮您完美解决 固定、破膜以及洗涤步骤不影响Fixable Viability Dye的染色，而PI、7-AAD的染色通常是放在其他抗体孵育完成后进行，不能洗涤即要上机检测；对于胞内抗体的染色，由于经过了固定步骤，经过PI或7-AAD染色后所有的细胞都是阳性，所以他们只适合于胞膜染色的死活细胞鉴定。 试剂 ◎ Annexin V Apoptosis Detection kit (Cat. No. 88-8007, 88-8006, 88-8005, 88-8102, or 88-8008) ◎ 10X Binding buffer ◎ Annexin conjugated to APC, eFluor 450, FITC, PE or PerCP-eFluor 710 ◎ Fixable Viability Dye eFluor® 660 (Cat. No. 65-0864), Fixable Viability Dye eFluor® 506 (Cat. No. 65-0866) or Fixable Viability Dye eFluor® 780 (Cat. No. 65-0865) 注意: Fixable Viability Dye eFluor® 450不推荐与AnnexinV检测试剂盒同时使用 ◎ Foxp3 Staining Buffer Set (Cat. No. 00-5523) ◎ Flow Cytometry Staining Buffer (Cat. No. 00-4222) ◎ PBS (azide- and serum/protein-free PBS) 实验方法 1. 用蒸馏水稀释 10X Binding Buffer 至 1X ； 2. 标记表面marker； 3. 用不含叠氮钠及血清的PBS洗细胞两次； 4. 在不含叠氮钠及血清的PBS按1-10x106 cells/mL 的浓度重悬细胞； 5. 每1mL细胞中加入 1 μL of Fixable Viability Dye并立即涡旋混匀； 6. 2-8°C避光孵育30分钟； 7. 孵育完成后，务必用含蛋白的缓冲液，如Flow Cytometry Staining Buffer洗两次细胞； 8. 用1X Binding Buffer洗一次细胞； 9. 在1X Binding Buffer中按1-5x106 cells/mL浓度重悬细胞； 10. 100 μL细胞悬液中加入5 μL荧光标记的Annexin V； 11. 室温避光孵育10-15分钟； 12. 用1X Binding Buffer洗细胞一次； 13. 固定破膜，用破膜缓冲液洗细胞； 注意: 此时已经不需要保持缓冲液中的钙离子，因为AnnexinV已经结合到细胞表面了 14. 进行胞内marker的标记； 15. 完成后上机分析。 更多关于Fixable Viability Dye的介绍，请戳以下标题： Fixable Viability Dye可固定的死活细胞鉴定染料 eBoscience |
