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ELISA样品处理系列一:小鼠组织处理方法

作者:池博专刊    发布日期:2020-08-21 14:00


01 小鼠大脑匀浆步骤

• 提取缓冲液:PBS含有蛋白酶抑制剂混合物

• 步骤:处死动物并取头部。解剖获取脑区(海马体和皮质)。并用2-甲基丁烷在干冰上快速冷冻。将大脑样本置于含有蛋白酶抑制剂混合物的无菌PBS中,均质。4°C,11000 rpm,离心20分钟。取上清备用。

• 参考文献:Lee, J., S.L. Chan, and M P. Mattson (2002) Adverse effect of a presenilin-1 mutation in microglia results in enhanced nitric oxide and inflammatory cytokine responses to immune challenge in the brain. Neuromolecular Medicine 2(1):29-45


02 小鼠根尖周组织匀浆的制备方法

• 提取缓冲液:10 mM HEPES,100 μg BSA组分V,100 μg Zwittergent-12,50 μg/mL gentamicin,,1 μg/mL aprotinin和leupeptin,0.1 μM EDTA(溶于RPMI 1640)

• 步骤:冷冻的根尖周组织样本,加650-800 μl的提取缓冲液。孵育混合物置于冰上并超声处理20-30秒。离心收集上清液并在-70°C下冷冻保存备用。

• 参考文献:

Balto, K., H. Sasaki, and P. Stashenko (2001) Interleukin-6 deficiency increases inflammatory bone destruction. Infection and Immunity February:744-750

Wang, C.Y. and P. Stashenk (1991) The role of interleukin-1 alpha in the pathogenesis of periapical bone destruction in a rat model system. Oral Microbiol. Immunol. 8:50-56.


03 小鼠脾脏肿瘤及细胞液组分的制备方法

• 提取缓冲液:50 mM磷酸钾,pH 7.1,0.1 M NaCl,2 mM EDTA,0.4 mM phenylmethylsulfonyl fluoride,60 μg/mL soybean trypsin inhibitor,2 μg/mL leupeptin,2 μg/mL aprotinin,2 μg/mL pepstatine

步骤:切除脾脏肿瘤组织,立即在液氮中冷冻并在-70 °C下储存。冷冻组织在冰浴预冷提取缓冲液中化冻。冰浴,撕裂组织。然后4℃下,超声处理。4℃下以100000 × g离心15分钟去除碎片,所得上清再次在4℃下以100000 × g离心30分钟。上清液含有胞浆蛋白,颗粒包含膜部分。

参考文献:Yao, M., S, Kargman, E.C. Lam, C.R. Kelly, Y.X. Zheng, P. Luk, E. Kwong, J.F. Evans and M.M. Wolfe (2003) Inhibition of cyclooxygenase-2 by rofecoxib attenuates the growth and metastatic potential of colorectal carcinoma in mice. Cancer Research 63(3):586-592

 

 

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