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Th细胞检测方案---技术要点汇总

作者:联科生物    发布日期:2020-01-14 15:00

1. Th检测一般操作步骤:


2. 人/小鼠/大鼠Th检测方案:
 

人/大鼠Th1/Th2
CD3/
CD8/IFN-γ/IL-4
人/大鼠Th17
CD3/
CD8/IL-17A
小鼠Th1/Th2
CD3/
CD4/IFN-γ/IL-4
小鼠Th17
CD3/
CD4/IL-17A
 

3. 人全血Th检测为什么要CD3/CD8反设门?

PMA/Ionocymin刺激后,CD4分子发生内吞,表面检测到的CD4分子少,所以人全血Th检测要CD3/CD8反设门。

4. 如何判断PMA/Ionocymin刺激活化成功?


5. 刺激时间如何确定?

图:对刺激时间做了不同时间点的摸索,发现刺激5小时时效果最佳; 对于初次实验,需要做一下预实验,确定最佳条件。


6. 抗凝剂该如何选择?

由上图可知,抗凝剂选择肝素钠或肝素锂,不影响Th细胞的活化和细胞因子的分泌。

非肝素抗凝血(如ETDA、枸橼酸钠抗凝血),可通过淋巴细胞分离液处理后,再进行刺激/阻断,仍然可以检测到细胞因子,如下图:

人EDTA抗凝血(Th1)
 


7. 大鼠全血检测Th的特殊性:

a) 大鼠全血(即便是肝素抗凝)如直接用PMA/Ionomycin刺激,在后续实验过程中无法溶血,影响检测;

解决办法:使用大鼠淋巴细胞分离液提取PBMC,分离后用PMA/Ionomycin刺激

b) 大鼠CD4在刺激后也会内陷,须用CD3/CD8反设门;

c) 目前还没有大鼠CD69抗体,也没有其他报道的可指示活化成功的指标,无法判断活化是否成功;

图:SD大鼠肝素抗凝血(A)、EDTA抗凝血(B)和枸橼酸钠抗凝血(C)经大鼠淋巴细胞分离液分离得到PBMC后,流式检测Th1。
 

8. 联科生物Th检测试剂盒:

 
目录号 存货名称 规格 目录价
70-KTH101-25/100 Human Th1/Th2 staining kit 25/100T 2235/8380
70-KTH117-25/100 Human Th17 staining kit 25/100T 2344/8790
70-KTH201-25/100 Mouse Th1/Th2 staining kit 25/100T 1620/6075
70-KTH217-25/100 Mouse Th17 staining kit 25/100T 1700/6375
70-KTH001-25/100 Human Th1/Th2/Th17 staining kit 25/100T 2800/10500
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