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敲黑板!知识点记一下:内参抗体

作者:联科生物    发布日期:2020-01-08 10:00


师弟,你以后要做WB吗

要啊cool

那你知道内参抗体吗

不是很清楚诶sad

那让为兄告诉你好了

好啊
敲黑板!知识点哈enlightened


内参是内在参照,在各组织和细胞中表达相对恒定,在检测某些功能蛋白的表达水平变化时用它做参照物,可以校正蛋白定量、上样过程中存在的实验误差,保证实验结果的准确性。常见的主要有Actin、GAPDH、Tubulin:


Actin即肌动蛋白,是细胞的一种重要骨架蛋白。β-actin是横纹肌肌纤维中的一种主要蛋白质成分,也是肌肉细丝及细胞骨架微丝的主要成分,分布广泛。β-actin抗体是Western Blot很好的内参,分子量大小为42kDa左右。不适用于骨骼肌样本。


GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western Blot蛋白质标准化的内参。在一些病理情况下如组织缺氧、糖尿病等,某些类型的细胞中GAPDH表达会增加。


Tubulin即微管蛋白,是细胞的一种骨架蛋白。Tubulin分为α、β、γ、δ、ε等多种tubulin,其中α-Tubulin和β-Tubulin(55kDa)是形成微管的最主要的两种Tubulin。作为内参,β-tubulin的蛋白水平通常不会发生改变,因此被广泛用于Western Blotting时上样量是否一致的参照,也常被用于免疫染色观察细胞的微管结构。对抗菌和抗有丝分裂药物耐受时,Tubulin的表达会有所改变。


如 何 选 择 内 参 ?

 

►  (1) 目的蛋白大小:建议内参与目的蛋白的分子量最好相差5kDa以上;

► (2) 样本的组织来源:某些细胞中,由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高,不适合用GAPDH做内参;

► (3) 内参抗体可检测的种属类型越多,在使用过程中的选择余地就越大;单克隆抗体一般在特异性、稳定性以及效价都要优于多克隆抗体;

► (4) 抗体的效价:即相当于实际应用时的稀释比率;

► (5) 内参抗体哪家好,联科生物来帮你:联科生物的内参抗体均为小鼠单抗,且稀释比均达到1:1000-1:10000。


联 科 内 参

 
目录号 产品名称 规格 目录价
ab008-040 β-Actin Mouse mAb 40 μL 490
ab008-100 β-Actin Mouse mAb 100 μL 980
ab009-040 β-Tubulin Mouse mAb 40 μL 490
ab009-100 β-Tubulin Mouse mAb 100 μL 980
ab010-040 β-Actin-HRP Mouse mAb 40 μL 590
ab010-100 β-Actin-HRP Mouse mAb 100 μL 1180
ab011-040 GAPDH-HRP Mouse mAb 40 μL 590
ab011-100 GAPDH-HRP Mouse mAb 100 μL 1180
ab012-040 β-Tubulin-HRP Mouse mAb 40 μL 590
ab012-100 β-Tubulin-HRP Mouse mAb 100 μL 1180
Mab5465-040 Anti-GAPDH monoclonal antibody 40 μL 400
Mab5465-100 Anti-GAPDH monoclonal antibody 100 μL 800
 


内 参 引 用 文 献

 

►  [1] Yang X, Zhu L Q, Lin J, et al. Doxycycline Induces Mitophagy and Suppresses Production of Interferon-β in IPEC-J2 Cells[J]. Front Cell Infect Microbiol, 2017, 7: 21 IF=3.518


►  [2] Li C L, Leng Y, Zhao B, et al. Human iPSC-MSC-Derived Xenografts Modulate Immune Responses by Inhibiting the Cleavage of Caspases[J]. Stem Cells, 2017, 35: 1719-1732 IF=5.614


►  [3] Li X T, Yu L, Gao J, et al. Apelin Ameliorates High Glucose-Induced Downregulation of Connexin 43 via AMPK-Dependent Pathway in Neonatal Rat Cardiomyocytes[J]. Aging Dis, 2018, 9(1): 66-76 IF=4.232


►  [4] Zou W Y, Xu W, Song Z B, et al. Proteomic Identification of an Upregulated Isoform of Annexin A3 in the Spinal Cords of Rats in a Neuropathic Pain Model[J]. Front Neurosci, 2017, 11:484 IF=3.648


►  [5] Lei B L, Peng W, Xu G, et al. Activation of G protein-coupled receptor 30 by thiodiphenol promotes proliferation of estrogen receptor α-positive breast cancer cells[J]. Chemosphere, 2017, 169: 204-211 IF=5.108


►  [6] Chen M, Chen Q, Cheng X W, et al. Zn2+ mediates ischemia-induced impairment of the ubiquitin-proteasome system in the rat hippocampus[J]. J NEUROCHEM, 2009, 111(5): 1094-1103 IF=4.87

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