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作者：Life官网 发布日期：2014-04-04 12:00
| Life Technologies提供了用于细胞功能和健康检测的各种试剂。其中许多分析以荧光或比色法为基础，具有灵敏性、便利性和安全性。这些产品已经过多种仪器平台验证，包括显微镜、流式细胞仪、酶标仪和高内涵筛选，能够实现各种细胞功能的分析： ⇒ 细胞活性和细胞毒性 ⇒ 细胞增殖和细胞周期 ⇒ 细胞凋亡 ⇒ 自噬 ⇒ 氧化应激 ⇒ 内吞作用和吞噬作用 ⇒ 细胞内离子 本文为大家介绍细胞凋亡的产品 细胞凋亡(细胞程序性死亡)是细胞正常发育过程中，由遗传控制的细胞消亡现象。凋亡调控异常与许多疾病状态有关，例如阿尔茨海默病、中风以及癌症。区别于坏死细胞的是，凋亡细胞的形态学特征为核染色质固缩、细胞皱缩以及产生膜包裹凋亡小体。细胞凋亡的生物化学特征在于基因组的片段化及几种细胞蛋白的解离或降解。 与细胞活性一样，无法通过任何单一参数来准确界定细胞彻底死亡；因而采用几种不同的方法研究细胞凋亡通常十分有利。候选抗肿瘤药物若无法诱导细胞凋亡，其临床功效通常较差，因此凋亡分析成为重要的高通量药物筛选工具。一、caspase活化 1.活细胞caspase检测 Vybrant® FAM Caspase Assay Kit和Image-iT® LIVE Caspase Detection Kit以新颖技术检测活细胞中活化的caspase，利用的是caspase的荧光抑制剂(FLICA™)。此试剂中的氟甲基酮(FMK)可通过caspase特异性氨基酸序列与cysteine进行共价反应，并接上carboxyfluorescein基团(FAM)作为信号报告分子。FLICA™可通过识别序列与活化的caspase的酶反应中心相互作用，接着通过FMK共价结合。FLICA™抑制剂可穿透细胞，且不具细胞毒性。未结合的FLICA™分子会扩散至细胞外，经冲洗即可去除；剩余的绿色荧光信号则可直接反映出加入抑制剂时处于活化状态的capase量。Vybrant® FAM Caspase Assay Kit可用于流式检测，Image-iT® LIVE Caspase Detection Kit则可用于成像。
CellEvent® Caspase-3/7 Green检测试剂是一种适用于活化的 caspase-3/7的新型荧光底物，可用于活细胞及固定细胞成像，最大吸收/发射波长约为 502/530 nm。该产品是一个与核酸结合染料相连的四个氨基酸多肽(DEVD)，在凋亡细胞中，caspase-3/7 活化后，DEVD 肽被切断，使染料能够与DNA 结合，并产生明亮的荧光。CellEvent® 试剂适用于成像(图8)、高内涵筛选和流式细胞术。
2 .PARP蛋白质水解 在凋亡过程中，ICE家族成员如caspase-3及caspase-7会将PARP裂解而产生85 kDa和25 kDa的片段。RARP裂解是细胞凋亡中最典型的特征之一。Anti-PARP FITC Apoptosis Kit包含了具FITC结合物的anti-PARP抗体，能专一性辨识裂解后的PARP所产生的85 kDa (p85)片段，而排除完整全长的PARP蛋白。细胞可利用流式细胞仪加以分析，并以阳性FITC染色检测正处于细胞凋亡过程的细胞百分比。 二、染色质固缩与DNA片段化 1 染色质固缩 在凋亡细胞中，核染色质固缩的情形会增加，这些压缩的细胞核经部分核染料标记后，会呈现高度荧光状态。Hoechst33342为可经UV激发的核酸染料，能轻易地被所有细胞吸收。此染料的蓝色荧光在凋亡细胞的的浓缩细胞核中格外明亮。相比之下，PI仅能进入细胞膜受损的细胞。同时使用这两种染料，便能以流式细胞仪或荧光显微技术获得的染色结果区别健康细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
2 TUNEL检测 细胞凋亡过程中发生的DNA片段化会导致DNA链断裂。TUNEL检测(terminal deoxynucleotidyl transferase dUPT nick end labeling)则广泛应用于检测凋亡细胞中的DNA缺口。DNA片段化是检测细胞凋亡末期阶段最可靠的方法之一，DNA片段经核酸酶裂解或造成切口后，会暴露出大量的3’-羟基端。这些末端接着通过TUNEL技术以BrdUTP及terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)加以标记。一旦嵌入DNA后，BrdU便能利用标有Alexa Fluor® 488或FITC的anti-BrdU抗体进行检测。
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