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师姐不会告诉你的ELISA样品处理方法,看这个就够了……

作者:联科生物    发布日期:2020-08-26 10:00



小鼠心脏组织处理方法


提取缓冲液:100 mM PIPES (pH 7)、500mM NaCl、0.2%Triton X-100、2mM EDTA、200μM PMSF和蛋白酶抑制剂混合物(Sigma-Aldrich)

步骤:取左心室组织,在异戊烷中冷冻。将~10 mg左心室组织于2–3 ml提取缓冲液中匀浆,然后在4℃下16000g离心30分钟。上清用于 ELISA法测定BDNF蛋白水平。单位pg /mg总蛋白。

参考文献:Agrimi, J., C. Spalletti, C. Baroni, G. Keceli, G. Zhu, A. Caragnano, M. Matteucci, S. Chelko, G. A. Ramirez-Correa, D. Bedja, V. Casieri, N. Di Lascio, A. Scalco, A. P. Beltrami, N. Paolocci, M. Caleo and V. Lionetti (2019). "Obese mice exposed to psychosocial stress display cardiac and hippocampal dysfunction associated with local brain-derived neurotrophic factor depletion." EBioMedicine 47: 384-401.


小鼠肝组织处理方法


提取缓冲液:RIPA缓冲液(50 mM Tris–HCl,150 mM氯化钠,1 mM EDTA,1%NP-40,1%脱氧胆酸钠,0.1%十二烷基硫酸钠),加蛋白酶抑制剂混合物(100×;Cell Signaling Technology,USA)

步骤:肝组织(50 mg)在提取缓冲液中匀浆。离心取上清,采用ELISA法检测了IL‐25, IL‐33, IL‐1β, MMP2, MMP9, 及TIMP1的含量。

参考文献:Loh, Z., R. L. Fitzsimmons, R. C. Reid, D. Ramnath, A. Clouston, P. K. Gupta, K. M. Irvine, E. E. Powell, K. Schroder, J. L. Stow, M. J. Sweet, D. P. Fairlie and A. Iyer (2019). "Inhibitors of class I histone deacetylases attenuate thioacetamide-induced liver fibrosis in mice by suppressing hepatic type 2 inflammation." Br J Pharmacol 176(19): 3775-3790.


小鼠脾脏肿瘤的制备方法


提取缓冲液:50 mM磷酸钾,pH 7.1,0.1 M NaCl,2 mM EDTA,0.4 mM phenylmethylsulfonyl fluoride,60 μg/mL soybean trypsin inhibitor,2 μg/mL leupeptin,2 μg/mL aprotinin,2 μg/mL pepstatine

步骤:切除脾脏肿瘤组织,立即在液氮中冷冻并在-70 °C下储存。冷冻组织在冰浴预冷提取缓冲液中化冻。冰浴,撕裂组织。然后4℃下,超声处理。4℃下以100000 × g离心15分钟去除碎片,所得上清再次在4℃下以100000 × g离心30分钟。上清液含有胞浆蛋白,颗粒包含膜部分。

参考文献:Yao, M., S, Kargman, E.C. Lam, C.R. Kelly, Y.X. Zheng, P. Luk, E. Kwong, J.F. Evans and M.M. Wolfe (2003) Inhibition of cyclooxygenase-2 by rofecoxib attenuates the growth and metastatic potential of colorectal carcinoma in mice. Cancer Research 63(3):586-592.


小鼠肺组织处理方法


提取缓冲液:1×磷酸盐缓冲液(PBS)

步骤:左肺在1×磷酸盐缓冲盐水中机械破坏,经过4次冷冻/解冻循环以打破细胞膜,然后4℃下,5000g,离心5分钟,回收上清用于ELISA法测定Ang II 浓度。

参考文献:Gonzalez-Tajuelo, R., M. de la Fuente-Fernandez, D. Morales-Cano, A. Munoz-Callejas, E. Gonzalez-Sanchez, J. Silvan, J. M. Serrador, S. Cadenas, B. Barreira, M. Espartero-Santos, C. Gamallo, E. F. Vicente-Rabaneda, S. Castaneda, F. Perez-Vizcaino, A. Cogolludo, L. J. Jimenez-Borreguero and A. Urzainqui (2020). "Spontaneous Pulmonary Hypertension Associated With Systemic Sclerosis in P-Selectin Glycoprotein Ligand 1-Deficient Mice." Arthritis Rheumatol 72(3): 477-487.


小鼠肾脏组织处理方法


提取缓冲液:0.1 M Tris-HCl (pH 7.4)

步骤:将0.5 g肾组织与5 ml 提取缓冲液混合。用机械搅拌器搅拌均质。匀浆离心15分钟(5000g)两次。取上清用ELISA法测TNF-α和IL-1β浓度。

参考文献: Jaremek, M., Nieradko-Iwanicka, B (2020). " The effect of subacute poisoning with fenpropathrin on mice kidney function and the level of interleukin 1 beta and tumor necrosis factor alpha" MOLECULAR BIOLOGY REPORTS 47(6):4861-4865.


小鼠脑组织处理方法

方法一:

提取缓冲液:0.9%生理盐水

步骤:麻醉小鼠,取脑组织。按每200 mg加1 ml的量加0.9%生理盐水,机械研磨,匀浆在4℃下以12000 rpm离心10 min。取上清用于ELISA法检测IL-1β, IL-6, 及TNF-α的含量。

参考文献:Lai, N., D. Wu, T. Liang, P. Pan, G. Yuan, X. Li, H. Li, H. Shen, Z. Wang and G. Chen (2020). "Systemic exosomal miR-193b-3p delivery attenuates neuroinflammation in early brain injury after subarachnoid hemorrhage in mice." J Neuroinflammation 17(1): 74.


方法二:

提取缓冲液:100 mM PIPES (pH 7)、500mM NaCl、0.2%Triton X-100、2mM EDTA、200μM PMSF和蛋白酶抑制剂混合物(Sigma-Aldrich)

步骤:取海马组织,在异戊烷中冷冻。将整个海马体于2–3ml提取溶解缓冲液中匀浆,然后在4℃下16000g离心30分钟。上清用于 ELISA法测定BDNF蛋白水平。单位pg /mg总蛋白。

参考文献:Agrimi, J., C. Spalletti, C. Baroni, G. Keceli, G. Zhu, A. Caragnano, M. Matteucci, S. Chelko, G. A. Ramirez-Correa, D. Bedja, V. Casieri, N. Di Lascio, A. Scalco, A. P. Beltrami, N. Paolocci, M. Caleo and V. Lionetti (2019). "Obese mice exposed to psychosocial stress display cardiac and hippocampal dysfunction associated with local brain-derived neurotrophic factor depletion." EBioMedicine 47: 384-401.


方法三:

提取缓冲液:PBS含有蛋白酶抑制剂混合物

步骤:处死动物并取头部。解剖获取脑区(海马体和皮质)。并用2-甲基丁烷在干冰上快速冷冻。将大脑样本置于含有蛋白酶抑制剂混合物的无菌PBS中,均质。4°C,11000 rpm,离心20分钟。取上清备用。

参考文献:Lee, J., S.L. Chan, and M P. Mattson (2002) Adverse effect of a presenilin-1 mutation in microglia results in enhanced nitric oxide and inflammatory cytokine responses to immune challenge in the brain. Neuromolecular Medicine 2(1):29-45.


联科生物国产ELISA试剂盒知名生产商。6项国家专利支撑,8大质控指标护航!值得您信赖!目前,小鼠ELISA指标有100多个,持续更新中,部分小鼠指标如下:
 

主目录号 Product Name 产品名
EK2317 Mouse ACE/CD143 ELISA Kit 小鼠血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE)ELISA试剂盒
EK295 Mouse Adiponectin/Acrp30ELISA Kit 小鼠Adiponectin/Acrp30ELISA试剂盒
EK2249 Mouse AXL ELISA Kit 小鼠AXL(Anexelekto)受体酪氨酸激酶ELISA试剂盒
EK2127 Mouse BDNF ELISA Kit 小鼠脑源性神经营养因子(BDNF)ELISA试剂盒
EK287 Mouse CCL2/MCP-1 ELISA Kit 小鼠CCL2/MCP-1ELISA试剂盒
EK287HS Mouse CCL2/MCP-1 HighSensitivity ELISA Kit 小鼠CCL2/MCP-1 高敏ELISA试剂盒
EK261 Mouse CCL3/MIP-1α ELISA Kit 小鼠趋化因子配体3 (CCL3) ELISA试剂盒
EK262 Mouse CCL4/MIP-1β ELISA Kit 小鼠趋化因子配体4 (CCL4) ELISA试剂盒
EK2129 Mouse CCL5/RANTES ELISA Kit 小鼠 CCL5/RANTES ELISA试剂盒
EK2130 Mouse CCL11/Eotaxin ELISA Kit 小鼠 CCL11/Eotaxin ELISA试剂盒
EK2211 Mouse CCL20/MIP-3α ELISA Kit 小鼠趋化因子CC配体20/巨噬细胞炎性蛋白3aELISA试剂盒
EK2216 Mouse CCL22/MDC ELISA Kit 小鼠趋化因子配体22/巨噬细胞来源的趋化因子(MDC)ELISA试剂盒
EK2311 Mouse CD30/TNFRSF8 ELISA Kit 小鼠CD30 (CD30/TNFRSF8)ELISA试剂盒
EK2290 Mouse Complement Factor D/Adipsin ELISA Kit 小鼠 Complement Factor D/Adipsin ELISA试剂盒
EK2251 Mouse C-peptide ELISA Kit 小鼠C肽ELISA试剂盒
EK2251HS Mouse C-peptide High Sensitivity ELISA Kit 小鼠C肽高敏ELISA试剂盒
EK294 Mouse C-Reactive Protein/CRP ELISA Kit 小鼠C-反应蛋白ELISA试剂盒
EK296 Mouse CXCL1/KC ELISA Kit 小鼠CXCL1/KCELISA试剂盒
EK2142 Mouse CXCL2/MIP-2 ELISA Kit 小鼠趋化因子CXC配体2/巨噬细胞炎症蛋白2ELISA试剂盒
EK2143 Mouse CXCL9/MIG ELISA Kit 小鼠趋化因子CXC配体9 (CXCL9)ELISA试剂盒
EK268 Mouse CXCL10/IP-10 ELISA Kit 小鼠C-X-C基序趋化因子10ELISA试剂盒
EK2111 Mouse Dkk-1 ELISA Kit 小鼠Dickkopf相关蛋白1 (Dkk-1)ELISA试剂盒
EK2342 Mouse E-Cadherin ELISA Kit 小鼠E-钙粘蛋白(E-Cadherin)ELISA试剂盒
EK293 Mouse EGF ELISA Kit 小鼠EGF ELISA试剂盒
EK2149 Mouse Endoglin/CD105 ELISA Kit 小鼠内皮糖蛋白ELISA试剂盒
EK2E01 Mouse Erythropoietin/EPO ELISA Kit 小鼠促红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒
EK2174/2 Mouse Fetuin-A/AHSG ELISA Kit 小鼠胎球蛋白ELISA试剂盒
EK2285 Mouse FGF acidic ELISA Kit 小鼠FGF acidic ELISA试剂盒
EK269 Mouse G-CSF ELISA Kit 小鼠粒细胞集落刺激因子ELISA试剂盒
EK263 Mouse GM-CSF ELISA Kit 小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA试剂盒
EK263HS Mouse GM-CSF High Sensitivity ELISA Kit 小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF) 高敏ELISA试剂盒
EK2173 Mouse Granzyme B ELISA Kit 小鼠颗粒酶BELISA试剂盒
 
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