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BrdU/PI 双参数分析细胞周期

作者:联科生物    发布日期:2020-03-25 09:00



1.  检 测 原 理 :

5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),是人工合成的胸腺嘧啶脱氧核苷类似物,在DNA合成过程中(S 期),BrdU能够代替胸腺嘧啶掺入正在复制的DNA分子中。BrdU与PI同时染色,通过流式细胞术可以直接测定出合成期的细胞比例,避免PI单独染色分析时的主观估计,能更好地反映细胞的合成期情况。


2.  注 意 事 项:

染色时,必须保证变性DNA的结构完全打开,使细胞核中的BrdU暴露出来,这样才能与荧光抗体充分结合。如DNA结构未完全打开,荧光标记就会很弱;如DNA变性过度,DNA发生解链,PI标记也会很弱;所以,以上两种情况都不能正确地反映细胞周期的真实情况。

加热变性DNA的方法比较剧烈,可选择采用酸化或者DNase消化变性的方法,减少对其他细胞蛋白的损伤,但仍建议BrdU/PI双染的细胞不宜再同时标记其他抗原。


3.  BrdU/PI 双染 的 优 点:

DNA变性时可同时被PI染色,这样就能够准确定量S期细胞,分析掺入了BrdU的细胞(增殖的细胞)在细胞周期中所处的阶段(G0/G1、S、G2/M),如下BrdU/PI双染的流式图,横坐标是DNA用PI染色,纵坐标是BrdU用FITC染色,细胞的各个时期如下图所示。这种方法虽然耗时,但却是一种能够准确定量S期细胞的好方法,能将G0/G1、S和G2/M期区分得很清楚,这是PI单染做不到的。


 

4.  产 品 推 荐 :

 
目录号 产品名称 规格 目录价
CP001

BrdU Cell Proliferation Assay Kit

50T 4500


5. 试 剂 盒 组 分 :

 
组分编号
组分名称
瓶/管盖颜色
规格
储存条件
CP001A
Positive Control Cells
白色
5 ml
-20℃
避光
CP001B
BrdU Solution
粉色
1.2 ml
CP001C
Wash Buffer
蓝色
175 ml
2 - 8℃
避光
CP001D
Rinse Buffer
红色
130 ml
CP001E
Denaturation Buffer
无色
60 ml
CP001F
Neutralization Buffer
绿色
60 ml
CP001G
FITC anti-BrdU
橙色
300 µl
CP001H
PI/RNase A Staining Buffer
棕色
23 ml
 
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