eBioscience多因子细胞和组织样本裂解处理方法

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作者:eBioscience官网 发布日期:2016-10-24 09:00

正确的样本收集整理方法,是实验成功至关重要的步骤. 目前eBioscience ProcartaPlex(Luminex多因子检测)可以检测样本类型有: 细胞上清、血清、血浆、组织/细胞裂解液. 尽管其他生物学样本没有经过验证,但是理论上也可以检测,这些样本包括: 支气管肺泡灌洗液(BAL), 唾液,脑脊液(CSF), 尿液。

前面文章我们针对常见样本整理了收集、保存方法,具体请查阅:luminex多因子检测样本收集方法一览细胞、组织样本怎么做才能继续处理后面的多因子检测呢?小科带领大家来针对细胞、组织裂解液如何处理进行专题介绍。

关于裂解液,我们推荐使用eBioscience厂家强烈推荐的细胞裂解液。

厂商 存货编码 存货名称 规格型号 目录价
eBioscience 85-EPX-99999-000 ProcartaPlex Cell Lysis Buffer (20 mL) 20 mL 20 mL 1625

细胞样本裂解方案:? 贴壁细胞裂解方法

1. 培养1×106-1×107个细胞;

2. 使用胰酶消化收集细胞;

3. 将收集好的细胞转移至15ml圆形离心管,4ºC, 500g离心5min;

4. 小心去除上清,加入5ml预冷PBS重悬细胞,4ºC, 500g离心5min;重复步骤4;

5. 尽可能多的去除上清,小心不要碰到细胞沉淀。

6. 在上步骤获取的细胞中,加入200ul ProcartaPlex Cell Lysis Buffer(EPX-99999-000)。

7. 吹吸混匀8-10次,冰上孵育5min;

8. 将所有细胞转移到1.5ml离心管;

9. 4ºC, 14000g(离心机最大转速)离心10min;

10. 将上清转移到新管中。该上清可立即用于检测或者保存在-80ºc;

11. 按照多因子检测试剂盒操作方法检测。25ul细胞裂解液样本加入25ul Universal Assay Buffer(EPX-11111-000),作为一个样本加入到样本孔中。

? 悬浮细胞裂解方法

1. 培养1×106-1×107个细胞;

2. 将细胞转移到15ml圆形离心管,4ºC, 500g离心5min;

3. 小心去除上清,加入5ml预冷PBS重悬细胞,4ºC, 500g离心5min;

4. 尽可能多的去除上清,小心不要碰到细胞沉淀。

5. 在上步骤获取的细胞中,加入200ul ProcartaPlex Cell Lysis Buffer(EPX-99999-000)。

6. 吹吸混匀8-10次,冰上孵育5min;

7. 将所有细胞转移到1.5ml离心管;

8. 4ºC, 14000g(离心机最大转速)离心10min;

9. 将上清转移到新管中。该上清可立即用于检测或者保存在-80ºC。

10. 按照多因子检测试剂盒操作方法检测。样本孔加入25ul细胞裂解液和25ul Universal Assay Buffer(EPX-11111-000)。
可选步骤:
建议细胞裂解后上清进行蛋白定量检测。我们推荐使用Lowry法蛋白定量检测。建议将所有样本使用预冷的ProcartaPlex Cell Lysis Buffer调整样本蛋白浓度方为4-8 mg/ml。
组织样本裂解方案:
1. 收集组织样本-脾脏、肺、脑、肾脏、肝脏和心脏组织,称重。

2. 按照每100mg组织加入500ul ProcartaPlex Cell Lysis Buffer (EPX-99999-000)。

3. 使用研磨、机械匀浆器、磁珠裂解等方法将组织进行裂解匀浆;

4. 4ºC,16000g 离心10min;

5. 将上清转移到新离心EP管中。

6. 使用蛋白定量试剂盒对上清进行蛋白定量。

7. 使用1*PBS把样本进行稀释到10mg/ml;

8. 按照多因子检测试剂盒Protocol进行检测。样本孔加入25ul Universal Assay Buffer(EPX-11111-000)和25ul 稀释后的组织上清液。

Tissue Lyser Condition Total protein concentration (mg/ml)
  Hz Time(min) Control Mouse LPS treated Mouse (2h)
Spleen 25 0.5 114.1 115
Lung 25 0.5 108 96.3
Brain 25 0.5 92.8 70.5
Kidney 25 3 109.3 114.3
Liver 25 0.5 162 150.5
Heart 25 2 74.1 90.4

当然,如您愿意,可以将您的样本直接寄送给我们,我们帮您做样本处理和多因子检测。

以上信息来源:

1. 细胞裂解方法:点我查看相关PDF

2. 组织裂解方法:点我查看相关PDF