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流式核内蛋白染色步骤

作者:联科生物    发布日期:2018-11-06 11:00

 

MultiSciences #IC001 FoxP3/Transcription Factor Staining Buffer Kit使用方法,
也适用于胞浆和核内抗原的同时检测)

 

染表面抗体,按说明书条件孵育

全血样品孵育抗体后加入不含固定剂的溶血素(按厂家说明操作)溶血完毕

用 2ml 预冷的流式染色缓冲液(Flow Cytometry Staining Buffer)洗涤细胞

300 -400 g 离心 5 分钟,去上清

用 3 倍体积的固定/破膜稀释液(#ICD01)稀释固定/破膜浓缩液(#ICC01)

制成固定/破膜工作液,注意要新鲜配制,每个样本的用量为 1ml

旋涡震荡重悬细胞后加入 1ml 的固定/破膜工作液(1:3 稀释好)

再次旋涡混匀,避光 4℃孵育 30 分钟到 60 分钟

将破膜缓冲液(#ICB01)用去离子水 1:9 稀释,制成工作液

(每个样本的用量为 8.5ml)

无需洗涤,直接加入 2ml 破膜缓冲液工作液 (1:9 稀释好)

300 -400 g 离心洗涤细胞并弃去上清液

(可选)重复洗涤一次

加入 100 ul 流式染色缓冲液 重悬细胞

体系中加入 2 ul 胞内抗体来源的血清,室温避光孵育 30 分钟

体系加入适量的核内(及胞浆)抗原抗体,

对照管加入等量的同型对照,按说明书条件孵育

加入 2ml 破膜缓冲液工作液离心洗涤细胞并弃去上清液

(可选)重复洗涤一次

用 500ul 流式染色缓冲液重悬细胞,上机检测并分析

如不能立即检测,用 0.5ml 0.1~4%多聚甲醛重悬,

避光 4℃保存 24 小时内上机分析


注:具体抗体用量请参照说明书

相关产品:

 
  厂商   目录号   产品名称   规格
  MultiSciences     70-IC001-100   FoxP3/Transcription Factor Staining Buffer Kit   100T
  MultiSciences   70-S1001   Flow cytometry Staining buffer   125ml
  MultiSciences   70-F0001   多聚甲醛溶液,4%   100mL
  MultiSciences   70-LYS01   FCM Lysing solution(Fixative Free) 10X   100T
  MultiSciences   70-LYS02   FCM Lysing solution(Fixative Free) 10X   250T
  MultiSciences   70-LYS03   FCM Lysing solution(Fixative Free) 10X   500T
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