欢迎来到联科生物!
请登录|注册
全部分类
首页 > 生物资讯 > 技术资料 > 流式抗体选购常识

流式抗体选购常识

作者:联科生物    发布日期:2017-05-31 09:30

流式抗体选购常识


由于在流式细胞实验过程中,荧光抗体对单细胞悬液的标记效果直接影响实验的数据质量。因此,需要考虑各种影响流式抗体品质及检测效果的因素,例如抗体特异性、荧光素信号强弱、荧光素标记方式、同型对照等。


流式抗体的选择:


1 流式抗体本身也是抗体,所以选择流式抗体一定要满足抗体选择最基本的条件:目标蛋白特异性,反应种属以及应用实验。


2 流式抗体荧光标记的方式包括直接标记和间接标记两种。在流式实验过程中,尽量减少实验工序和过程,以保证实验的真实和准确性。因此在条件允许的范围内,建议尽量用直接标记的抗体进行实验而不去做间接标记。


3 流式抗体荧光标记的选择:如果实验中检测单一指标:不同荧光标记在不同的仪器上强度不同。FACS Calibur仪器为例:PE >APC >PE-Cy5 >PerCP >FITC >PerCP-Cy5.5,通常来说,PE最强,适用于弱表达抗原。FITC强度较弱,适用于强表达抗原,使用范围比较广。用户需根据检测的目标蛋白进行具体选择。如果同时检测多个指标:确认流式细胞仪能检测多少个通道:流式抗体每个通道只能选择1种荧光素。各个通道之间的荧光素可以随意搭配。如:实验者同时检测三个指标,可以在图1中绿色、黄色和红色三个通道中各选一个适当的荧光素标记,FITC、PE和PE-cy5。切忌所有指标选择同一个通道的荧光标记,以防止荧光的重叠和相互干扰,影响最后结果。因此,流式细胞仪的通道越多,同一份样本能同时做的表面/胞内标志就越多。常用荧光标记包括FITC, PE, PEcy5, PEcy5.5, APC等。
 

常见荧光素波长分布示意图

 

同型对照的选择:


流式细胞实验和其他抗体相关实验有点不同的就是需要选择同型对照。同型对照,是用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色,相当于实验的阴性对照。同型对照选择与标记抗体同种属来源,同亚型,同荧光标记的抗体。比如:抗人的CD3的PE标记的抗体,小鼠的IgG2a。同型对照选择PE标记的小鼠的IgG2a。


流式抗体使用注意事项:


1、建议实验细胞的数量和抗体的比例要适当。细胞过量或抗体过量都可能使实验结果受影响,因此需要优化试验条件。注:不同的流式技术对抗体的需求量有较大差异,例如传统流式细胞术 (采用鞘液流系统)需要1×106个细胞为起始上样量,抗体用量为10μl,而微流式细胞术 则只需5×105个细胞,抗体用量减少到5μl。


2、直标的流式抗体应该4℃避光保存,不要冷冻。


3、尽量选择经实验验证的流式抗体,以保证实验结果。默克密理博公司Milli-Mark系列流式抗体已经通过了实验验证,并且提供了相关数据图供用户参考。


相关参考:


流式细胞术(Flow Cytometry,FCM):是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒(如微球,细菌,小型模式生物等)逐个进行快速定量分析和分选的技术。流式细胞术产生于上世纪六七十年代,具有速度快、精度高、准确性好等优点,是非常先进的细胞定量分析技术。该技术被广泛的应用于细胞生物学、免疫学、血液学、肿瘤学、药理学、遗传学及临床检验等多个领域,如细胞周期、细胞凋亡、细胞活力的检测,淋巴细胞亚群与疾病的关系研究,器官移植后的免疫学监测,肿瘤的特异性指标的检测,药物作用机制研究,筛选新药等等。


流式细胞术的一般步骤:


 

今日推荐
  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 5

总排行

小鼠白细胞介素17A ELISA试剂盒
白细胞介素17A (IL-17或者IL-17A),是IL-17家族细胞因子类群...[详情]
转录因子活性检测试剂盒
在分子生物学中,一个转录因子通过绑定到一个特定...[详情]
造血干细胞(HSC)移植改善新方式
造血干细胞(HSC)移植可以通过瞬时预防干细胞死亡的...[详情]
细胞因子“缺氧”加速胶质瘤复发
研究发现“乏氧的胶质瘤组织中CCL20促进细胞的侵袭能力[详情]
细胞因子“缺氧”加速胶质瘤复发
记者4日从中科院合肥物质科学研究院获悉,该院科研人...[详情]
激动 | 孕期免疫钟真的存在!
在美国,每10个新生儿中就有1个早产,而目前医生还没...[详情]
《中国肿瘤免疫治疗产业图谱》重磅发布
在现代肿瘤学百余年历程的三次革命性突破中,调动患...[详情]
警惕:黑客可将数字信息编码进合成DNA
9月5日消息,据国外媒体报道,美国华盛顿大学研究人...[详情]
全国统一客服电话: 400-672-1600 网址:www.liankebio.com 邮箱:info@liankebio.com
版权所有:杭州联科生物技术股份有限公司
浙ICP备11037718号-1  浙公网安备 33010502002427号
在线客服
在线客服
  • 服务热线400-6721-600
    工作时间
    8:30-17:30
二维码
Powered By ShopEx