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作者：联科生物 发布日期：2008-04-17 13:00
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贴壁细胞和非贴壁细胞都适用。所有操作在无菌条件下进行。避免污染细胞，因为微生物污染也会还原alamarBlueTM，培养基中应添加抗生素如青霉素G（1U/ml）、两性霉素B（amphotericin B，0.0025ug/ml）。
氧化还原指示剂是pH敏感的，推荐使用磷酸缓冲液。10％胎牛血清对比色法检测无影响，但是会淬灭部分荧光；因此，用荧光法检测时对照溶液中需添加10％BSA。酚红对检测也有一定影响，结果会上调0.03%。一般来说，应使用非还原性的培养基，如RPMI1640、Hank’s－Eagle或 Dulbecco’s－Eagle。 在特殊系统中使用时，细胞密度、孵育时间、培养基成分及使用浓度等条件需要先优化。 收集需检测的细胞，以优化的密度铺于加入10％（v/v）alamarBlueTM的新鲜培养基上， 1、 细胞培养：RPMI培养基，添加HEPES、10％胎牛血清、1％谷氨酸盐、适当的抗生素； 2、 细胞覆盖率达80％时，用胰酶消化铺于微孔板中，密度在每孔825~80000个细胞。 3、 1个小时后，加入alamarBlueTM，37℃ 5％CO2培养 4、 到预定的时间点后检测alamarBlueTM的还原情况 注意：若检测的还原度不够，可选择继续培养再检测，这是该方法的一大优越之处 研究特殊药物对细胞周期的影响（如roscovitine，一种抗癌药、周期蛋白激酶抑制剂），胰酶消化细胞、收集并铺于含药物的培养基上，37℃ 5％CO2培养2天；除去之前的培养基换上含10％（v/v）alamarBlueTM的新培养基，在预定的时间点检测其还原度。 |
