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你了解细胞凋亡及其检测的要点吗?

作者:小科    发布日期:2022-01-05 09:00


细胞凋亡(apoptosis):属于细胞程序性死亡(Programmed Cell Death,PCD),是由基因控制的细胞自主、有序的死亡,在维持生物体内环境稳定方面发挥着重要作用。蝌蚪发育成青蛙的过程中,尾的消失就是生物学中典型的细胞凋亡现象。
 


细胞凋亡不仅是一种特殊的细胞死亡类型,而且具有重要的生物学意义及复杂的分子机制。细胞凋亡的过程大致可分为以下几个阶段:接受凋亡信号→凋亡调控分子间的相互作用→蛋白水解酶的活化(Caspase)→进入连续反应过程。
 


 



细 胞 凋 亡 典 型 特 征


从形态学角度观察细胞凋亡,其过程是多阶段的,首先是细胞体积缩小,连接消失,与周围的细胞脱离;然后是细胞质密度增加,线粒体膜电位消失,通透性改变,释放细胞色素C到胞浆;核质浓缩,核膜核仁破碎;胞膜有小泡状形成,膜内侧磷脂酰丝氨酸翻到膜外表面;Caspase活化,DNA降解成为约180bp-200bp片段;最终可将凋亡细胞遗骸分割包裹为几个凋亡小体,无内容物外溢,因此不引起周围的炎症反应。凋亡小体可迅速被周围专职或非专职吞噬细胞吞噬。

早期事件:
磷脂酰丝氨酸外翻
线粒体受损
细胞色素C释放
中期事件:
Caspase活化
晚期事件:
DNA片段化
凋亡小体形成


 

细胞凋亡与疾病的关系


对于人而言,健康状况下,机体内细胞凋亡处于一个平衡状态。当细胞凋亡出现异常,就极易引发各种疾病。
 

凋亡

过多

心血管疾病

心肌缺血、心力衰竭、再灌注损伤等

血液疾病

再生障碍性贫血等

神经疾病

阿尔兹海默病、帕金森综合征等

凋亡

不足

癌症

肝癌、肺癌、乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌等

自身免疫病

系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、自身免疫性甲状腺疾病等



Annexin V检测凋亡七大要点

1.接种——对数生长

细胞密度通常不超过1×106/ml,以免引起凋亡。

2. 收集——上清及铁壁细胞全部收集

部分凋亡细胞可能悬浮于培养上清中,须先收集上清,离心收集沉淀,再消化收集贴壁细胞,合并上清和消化下来的细胞。

3. 消化——选用Accutase酶

选用Accutase酶替代普通胰酶。Accutase酶已经在多种细胞系中得到验证,其消化更温和,可有效避免因消化过度使细胞膜的磷脂酰丝氨酸外翻,造成假阳性。(对凋亡不明显的实验强烈推荐)
 

4. 补偿调节——阳性质控

没有明显的凋亡,该如何调节补偿以及设门?联科生物凋亡试剂盒配备阳性质控液,补偿调节so easy!


5. 电压——足够大

大到快要超出边界。

6. 补偿——横平竖直

3、4象限横平;2、4象限竖直。

7. 漂亮结果——黄金分割(三分原则)
 


 


联科生物提供多种细胞凋亡试剂盒,质控严格,价格实惠,发货迅速。部分凋亡产品如下表所示:
 


 

产品名称
目录号
规格
100T
60T
30T
100T
Annexin V-FITC/PI apoptosis kit(适用于贴壁细胞)
60T
30T
100T
60T
30T
100T
60T
30T
 
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