解开囊泡(exosome)蕴藏的秘密

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作者:QIAGEN官网 发布日期:2014-10-01 15:00

近年来,exosome这种小囊泡正得到广泛的关注。exosome是直径约为30-150nm的小囊泡,在30年前被人们所发现。exosome天然存在于所有体液中,包括血液、唾液、尿液和母乳,且其蛋白、RNA和脂肪成分特异,早期的研究认为,exosome执行蛋白运输功能,特异靶定受体细胞,交换蛋白和脂类或引发下游信号事件。直到2007年,研究人员发现exosome也运输核酸,参与细胞间通讯。至此,这种小囊泡才被人重视,并成为热门的研究对象。

因此,exosome有望在多种疾病的早期诊断中发挥作用。今年8月,美国NIH为24个细胞外(exRNA)通讯方面的研究项目提供1700万美元的资助,主要关注exRNA作为潜在的生物标志物和疗法的临床实用性。

细胞外微泡, 运载RNA(包括mRNA、miRNA、lncRNA)、DNA及蛋白质,为细胞间信号交流起着重要作用。QIAGEN exoRNeasy Serum/Plasma MaxiKit大幅简化细胞外RNA纯化,让您能更快、更准确地了解细胞发出的信息,尽早提出您的生物学见解。

exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit采用亲和性膜离心柱,可从exosomes和来自血清或血浆中的其他细胞外微泡中高效分离RNA。Maxi规格的分离柱可处理多达4 ml的大体积样本,因此能够可靠检测低丰度RNA。该试剂盒能够快速、便利的获得结果,十分适用于敏感的下游应用。
试剂盒优势:
可处理大体积样本,可灵敏检测低丰度转录本

1小时内即可完成囊泡RNA的分离

采用离心柱纯化流程,能够平行处理多个样本

可从血清或血浆中分离miRNA和mRNA
性 能
exoRNeasy纯化exosomes和其他细胞外微泡与超速离心法相比,不仅速度更快,并且产物纯度更高。扫描电镜显示,虽然这两种纯化技术都能够纯化预期大小的完整的囊泡,但超速离心法的产物还含有很多不符合预期的更小、或其他形状的细胞结构。

此外,Bioanalyzer分析显示,exoRNeasy和传统超速离心方法分离得到的大RNA和小RNA长度和产量相似。

通过RT-qPCR实验对exoRNeasy纯化的RNA产物和exoEasy分离柱流出液进行分析,结果显示,exoRNeasy的产物包括血浆中所有mRNA,包括细胞外囊泡的miRNA,且不含细胞。
原 理
exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit改进了传统的超速离心微泡分离方法,能够在20分钟内快速纯化得到细胞外囊泡。该试剂盒采用Exosome Diagnostics, Inc.公司的技术,通过离心柱和特制缓冲液,从多达4 ml的预过滤血浆中分离exosomes。之后使用QIAGEN miRNeasy技术分离总RNA。整个实验流程,从血清/血浆样本到RNA产物,只需1小时。
操作流程

从细胞外微泡分离RNA的完整实验包括两步:纯化exosomes和分离RNA在exosomes纯化步骤,预过滤的血浆(不包含大于0.8 μM的微粒)与Buffer XBP混合,加至exoEasay亲和性膜离心柱上,结合到柱上。使用Buffer XWP洗涤结合在膜上的囊泡,之后使用QIAzol裂解。 在RNA分离步骤,在QIAzol洗脱液中加入氯仿,回收水相,将其与乙醇混合。包括miRNA在内的总RNA结合到离心柱上,洗涤三次后洗脱。

应 用
exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit高度适用于从血浆或血清样本中的囊泡重分离包括mRNA和miRNA的总RNA。
相关产品信息:

产品货号 产品名称
Y5-77064 exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit